| 第一部分 文献综述 | 第1-18页 |
| 1 前言 | 第10页 |
| 2 国内外的研究现状 | 第10-16页 |
| ·细胞因子的研究现状 | 第10-12页 |
| ·白细胞介素4的研究现状 | 第12-16页 |
| ·IL-4的产生及结构和特点 | 第13页 |
| ·IL-4的作用机制 | 第13-14页 |
| ·IL-4的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·IL-4的应用 | 第15-16页 |
| ·在疾病诊断与治疗方面的应用 | 第15页 |
| ·在疫苗佐剂中的应用 | 第15-16页 |
| ·生物学活性的测定 | 第16页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二部分 实验研究 | 第18-52页 |
| 实验一 IL-4基因的克隆鉴定、与序列分析 | 第18-32页 |
| 1 材料和方法 | 第18-26页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·实验动物、菌种和载体 | 第18页 |
| ·酶和试剂 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·溶液 | 第18-19页 |
| ·仪器与设备 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-26页 |
| ·PBMC诱导剂的选择 | 第19页 |
| ·淋巴细胞的分离与培养 | 第19-20页 |
| ·淋巴细胞的刺激诱导 | 第20页 |
| ·总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR扩增目的片段 | 第21-23页 |
| ·引物的设计策略 | 第21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第22页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第22-23页 |
| ·目的基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·PCR产物与pGEM-Teasy载体的连接 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第25-26页 |
| ·用碱裂解法小量提取重组质粒 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| 2 实验结果 | 第26-30页 |
| ·淋巴细胞的体外刺激活化 | 第26-27页 |
| ·RNA提取结果 | 第27页 |
| ·RT-PCR产物 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·猪IL-4基因序列分析 | 第28-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 实验二 原核表达及蛋白活性的测定 | 第32-45页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第32-35页 |
| ·表达引物的设计 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·目的片段的扩增 | 第33页 |
| ·目的片段与pGEX-4T-1载体的酶切回收 | 第33-34页 |
| ·目的片段与表达载体的连接转化 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的提取与鉴定 | 第34-35页 |
| ·组质粒的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物的检测 | 第35页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第35-37页 |
| ·包涵体形式重组蛋白的收集与处理 | 第35-36页 |
| ·包涵体的溶解 | 第36页 |
| ·硫酸铵沉淀法浓缩蛋白 | 第36页 |
| ·透析溶解的蛋白质 | 第36页 |
| ·蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·可溶性形式重组蛋白的表达提取 | 第37页 |
| ·可溶性形式重组蛋白的表达 | 第37页 |
| ·按照GST纯化试剂盒说明纯化 | 第37页 |
| ·重组蛋白生物活性分析 | 第37-38页 |
| 2 实验结果 | 第38-42页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白纯化效果的结果 | 第40页 |
| ·重组融合蛋白生物学活性分析 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 实验三 猪IL-4真核表达载体的构建及免疫佐剂效应研究 | 第45-52页 |
| 1 材料和方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·实验动物、菌种和载体 | 第45页 |
| ·酶和试剂 | 第45页 |
| ·培养基及溶液 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·引物设计与合成 | 第46页 |
| ·猪IL-4真核表达载体的构建、转化及鉴定 | 第46页 |
| ·重组真核表达载体质粒提取及纯化 | 第46-47页 |
| ·质粒大批量提取 | 第46页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第46-47页 |
| ·抗原的制备 | 第47页 |
| ·重组IL-4真核表达质粒疫苗佐剂试验 | 第47-48页 |
| ·家猪的免疫程序 | 第47-48页 |
| ·猪抗TSO18抗体动态水平检测 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-50页 |
| ·猪IL-4真核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·重组真核表达载体质粒提取及纯化 | 第49页 |
| ·重组IL-4真核质粒免疫佐剂效应 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第三部分 试验结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简介 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |