猪圆环病毒DNA竞争定量PCR检测方法的建立及初步应用
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-25页 |
| 一、 猪圆环病毒研究进展 | 第11-17页 |
| 二、 PCV诊断方法研究进展 | 第17-19页 |
| 三、 竞争定量PCR技术 | 第19-23页 |
| 四、 本研究的背景、目的和意义 | 第23-25页 |
| 实验内容 | 第25-46页 |
| 实验一 检测猪圆环病毒PCR方法的建立 | 第25-31页 |
| 1 材料和方法 | 第25-28页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·器材 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·细胞和毒株 | 第25页 |
| ·引物的设计 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·细胞培养及病毒增殖 | 第26页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第26-27页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第27-28页 |
| ·PCR条件标准化 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-30页 |
| ·PCR方法的建立与标化 | 第28页 |
| ·PCR的敏感性检测 | 第28-29页 |
| ·PCR的特异性检测 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 实验二 猪圆环病毒竞争定量PCR检测方法的建立 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·菌种与质粒 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·内参照目标模板pTP3P4DNA的构建 | 第32-33页 |
| ·竞争模板c-pTP3P4的构建 | 第33-34页 |
| ·竞争定量PCR的建立 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| ·内参标准模板的建立 | 第35页 |
| ·竞争性目标模板的建立 | 第35-37页 |
| ·竞争定量PCR方法的建立 | 第37-40页 |
| ·特异性检验 | 第37页 |
| ·敏感性检验 | 第37页 |
| ·重复性和稳定性 | 第37页 |
| ·竞争PCR检测 | 第37-38页 |
| ·标准曲线制作 | 第38-39页 |
| ·浓度公式的推导 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 实验三 竞争定量PCR方法的初步应用 | 第42-46页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·仪器设备 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·样品 | 第42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·PCV病毒增殖实验 | 第43页 |
| ·临床样品的病毒含量检测 | 第43-45页 |
| 2 结果 | 第45页 |
| ·PCV带毒传代PK/15胞的病毒增殖结果 | 第45页 |
| ·病料检测结果 | 第45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 4 小结 | 第46页 |
| 结论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
