| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-35页 |
| 1 香蕉概述 | 第11-12页 |
| ·香蕉的分类地位及种类 | 第11页 |
| ·香蕉的生物学特性 | 第11-12页 |
| ·香蕉的经济价值 | 第12页 |
| 2 跃变型果实成熟的生理学与分子生物学研究概述 | 第12-16页 |
| ·乙烯与果实成熟 | 第12-13页 |
| ·乙烯的生物合成与基因表达 | 第13-14页 |
| ·乙烯生物合成途径 | 第13页 |
| ·ACC合成酶(ACS)及其多基因家族 | 第13-14页 |
| ·ACC氧化酶及其多基因家族 | 第14页 |
| ·组织对乙烯作用的敏感性 | 第14-15页 |
| ·乙烯信号传导的研究进展 | 第15-16页 |
| ·乙烯信号转导途径 | 第15页 |
| ·ETR1蛋白及基因 | 第15页 |
| ·ERS蛋白 | 第15-16页 |
| ·CTR1蛋白 | 第16页 |
| 3 其它与果实成熟相关的基因 | 第16-17页 |
| ·PG酶及其基因 | 第16页 |
| ·EGase及其基因 | 第16-17页 |
| 4 香蕉果实采后生理学及分子生物学研究现状 | 第17-22页 |
| ·香蕉采后生理学的研究 | 第17页 |
| ·分离与鉴定香蕉采后成熟相关基因 | 第17-21页 |
| ·采后果实乙烯生物合成相关基因克隆和调控 | 第17页 |
| ·采用差异筛选方法分离果实成熟相关基因 | 第17-18页 |
| ·重要基因的克隆与表达 | 第18-21页 |
| ·研究香蕉果实成熟的分子生物学机制的目的与意义 | 第21-22页 |
| ·香蕉在跃变型果实成熟机制研究中的作用 | 第21页 |
| ·研究香蕉果实成熟机理的分子遗传学基础的重要性 | 第21-22页 |
| 5 SMART PCR cDNA合成技术 | 第22-24页 |
| ·SMART PCR cDNA合成技术路线 | 第22-23页 |
| ·SMART PCR cDNA合成技术的特点 | 第23-24页 |
| 6 差异表达基因的分离策略 | 第24-30页 |
| ·差示筛选 | 第24-25页 |
| ·扣除杂交(Subtractive Hybridization) | 第25页 |
| ·与PCR技术相关的几种分离策略 | 第25-27页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第25-26页 |
| ·RNA指纹图谱技术 | 第26页 |
| ·代表性差异分析 | 第26-27页 |
| ·抑制差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)技术 | 第27-30页 |
| ·SSH技术路线(见图2) | 第27-28页 |
| ·SSH的特点 | 第28-29页 |
| ·SSH的应用 | 第29-30页 |
| 7 微列阵(microarrays)技术 | 第30-34页 |
| ·微列阵技术原理 | 第30-32页 |
| ·Microarray应用 | 第32-34页 |
| ·用cDNA mieroarray研究基因的表达谱 | 第32页 |
| ·用寡聚核苷酸微列阵进行基因表达研究和发现新基因 | 第32-33页 |
| ·突变和多态性检测 | 第33页 |
| ·对基因组文库作图 | 第33页 |
| ·DNA测序 | 第33-34页 |
| 8 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 SMART-PCR cDNA合成技术检测香蕉采后mRNA水平的变化 | 第35-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-38页 |
| ·香蕉果实总RNA的提取 | 第35-37页 |
| ·利用SMART PCR cDNA合成技术合成ds-cDNA | 第37-38页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第37页 |
| ·通过LD-PCR进行cDNA扩增 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-42页 |
| ·总RNA的电泳 | 第38-39页 |
| ·LD-PCR最佳循环数的确定 | 第39-40页 |
| ·不同材料mRNA表达差异分析 | 第40-42页 |
| 第三章 抑制差减杂交技术分离香蕉采后果实成熟特异表达基因 | 第42-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第42页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-50页 |
| ·ds-cDNA的合成 | 第42页 |
| ·ds-cDNA的纯化--柱层析 | 第42-43页 |
| ·限制性内切酶RsaⅠ消化ds-cDNA | 第43-44页 |
| ·接头连接 | 第44页 |
| ·第一次杂交 | 第44-45页 |
| ·第二次杂交 | 第45页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第47-49页 |
| ·感受态受体菌的制备: | 第47页 |
| ·连接反应 | 第47页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第47页 |
| ·碱法小量制备重组质粒: | 第47-49页 |
| ·不同方法鉴定重组子 | 第49-50页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·PCR方法鉴定重组子 | 第49-50页 |
| ·DNA序列测定与分析 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-56页 |
| ·抑制差减杂交中第二次PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| ·抑制差减文库的构建 | 第51页 |
| ·鉴定重组子 | 第51-54页 |
| ·鉴定重组子方法比较 | 第51-52页 |
| ·大规模鉴定重组子 | 第52-54页 |
| ·阳性克隆的DNA序列分析 | 第54-56页 |
| 第四章 cDNA微列阵技术(Microarray)进行基因表达分析 | 第56-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-60页 |
| ·探针的制备 | 第56-57页 |
| ·ds-cDNA的纯化 | 第56-57页 |
| ·探针的标记 | 第57页 |
| ·微列阵点样样品的制备 | 第57-58页 |
| ·微列阵点样 | 第58页 |
| ·杂交 | 第58-59页 |
| ·洗膜及显色 | 第59-60页 |
| ·数据处理与分析 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-66页 |
| ·微列阵的获得 | 第60-61页 |
| ·数据分析 | 第61-66页 |
| 第五章 BR-1 cDNA片段的Southern杂交分析 | 第66-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-68页 |
| ·基因组DNA的EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶消化 | 第66-67页 |
| ·探针的标记 | 第67页 |
| ·DNA的印记转移 | 第67页 |
| ·Southern杂交 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第69-79页 |
| 1 结论 | 第69-70页 |
| 2 讨论 | 第70-79页 |
| ·关于本研究所采用的技术 | 第70-72页 |
| ·SMART PCR cDNA合成技术用于检测香蕉采后mRNA水平的变化 | 第70页 |
| ·SSH技术 | 第70-71页 |
| ·cDNA微阵列技术 | 第71-72页 |
| ·关于香蕉采后成熟机理的研究 | 第72-79页 |
| ·乙烯生物合成及调控 | 第72页 |
| ·香蕉采后成熟启动时的信号转导 | 第72-75页 |
| ·G蛋白 | 第72-73页 |
| ·受体蛋白激酶 | 第73页 |
| ·磷脂酶D | 第73-75页 |
| ·香蕉采后成熟启动时的转录、翻译相关蛋白的表达 | 第75-76页 |
| ·物质能量代谢与果实品质形成的关系 | 第76-79页 |
| ·能量代谢与果实品质形成的关系 | 第76页 |
| ·物质代谢与果实品质形成的关系 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录1: BLASTN同源性比较结果 | 第84-87页 |
| 附录2: BLASTX同源性比较结果 | 第87-92页 |
| 附录3: ScanAlyze数据分析结果 | 第92-98页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
