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鱼类肌肉发育及成肌因子的进化

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
引言第10-44页
 胚胎肌肉发育第10页
 鱼类肌肉发育第10-12页
 特化信号第12-30页
  Hedgehog 信号系统第12-25页
   Hedgehog 蛋白的生化研究第15-16页
   Hedgehogs 的表达和功能第16-18页
   Hh信号的传导第18-25页
  肌肉发育中的Wnt 信号第25-27页
  TGF- β信号传导第27-29页
   Pax第28-29页
   Calcineurin第29页
  NFAT信号的控制第29-30页
 分化信号第30-44页
  MyoD家族基因的功能第30-32页
  MyoD 家族启动子中的调节元件第32-34页
  Myogenesis 的负调控第34-37页
   Id第34-35页
   Twist第35页
   MyoR 和mist-1第35页
   ZEB第35-37页
  Myogenesis 的正调节子第37-39页
   一般的转录因子第37-38页
   核激素受体第38-39页
  转录后调控第39-40页
   磷酸化-去磷酸化调控第39-40页
   肌肉基因表达的辅激活因子和MyoD的乙酰化第40页
  染色体重排第40-41页
  MyoD 蛋白的稳定化,泛素化,以及降解第41页
  细胞循环的控制第41-42页
   P21第41页
   E2F第41-42页
  成肌因子的进化第42页
  肌细胞成熟第42-44页
第一章.斑马鱼Gli2 蛋白表达;抗体的产生以及在斑马鱼胚胎中的分析第44-63页
 简介第44-45页
 材料和方法第45-50页
 结果第50-62页
  比较斑马鱼的Gli2 与果蝇的Ci第50-51页
  亲水/疏水性的决定第51-53页
  构建带有his-标记的重组蛋白以及Myc-标记的蛋白的质粒第53页
  重组蛋白的产生第53-54页
  诱导物IPTG 对重组蛋白量的影响第54页
  时间对重组蛋白产生量的影响第54-55页
  重组蛋白的可溶性以及其与亲合柱结合效率第55-56页
  TnT –体外转录翻译系统确定构建质粒的阅读框架第56-57页
  构建不同启动子驱动的Gli2第57页
  通过外源表达Gli2 分析抗体第57-58页
  Western 杂交分析外源表达的Gli2 时间过程第58-59页
  抗体纯化第59-62页
 讨论第62-63页
第二章 条纹鲈鱼(Striped Bass)肌肉调节因子Myf5 和Myogeni的特性以及肌肉特异性启动子的分析第63-78页
 简介第63-64页
 材料和方法第64-66页
 结果第66-69页
  从条纹鲈中分离Myf5 和myogenin基因以及其测序第66页
  条纹鲈Myf5 和myogenin 的序列分析以及其特征第66-67页
  Myf5 的GFP 及myogenin 的GFP转基因质粒的构建---第67页
  条纹鲈Myf5 以及myogenin启动子在斑马鱼中驱动肌肉特异性GFP 表达第67-68页
  条纹鲈和斑马鱼的Myf-5 和myogenin启动子的比较第68页
  比较斑马鱼和条纹鲈的Myf-5和myogenin基因组序列第68-69页
 讨论第69-78页
第三章:真鲷(Sparus aurata) 快肌和慢肌两个MyoD基因的不同表达第78-103页
 简介第78-80页
 材料和方法第80-85页
 结果第85-103页
  分离真鲷的MyoD1 和MyoD2 基因组序列第85页
  基因组序列分析第85页
  外显子/内含子交界的确定第85页
  蛋白序列分析第85-86页
  构建MyoD1-GFP 和MyoD2-GFP 质粒第86页
  forskolin 处理真鲷胚胎条件的确定第86-87页
  原位杂交研究真鲷中MyoD1和MyoD2时间及空间表达第87-88页
  通过RT-PCR 检测MyoD1和MyoD2在真鲷胚胎,以及成体中慢肌以及快肌的分布第88页
  Forskolin 抑制MyoD1 在真鲷胚胎的近轴层细胞的表达第88页
  真鲷MyoD1 和MyoD2 的启动子在斑马鱼胚胎中驱动肌肉特异性GFP表达第88-103页
第四章:文昌鱼(B. belcheri)中一个新的MyoD基因的进化方向以及其启动子在骨骼肌和心肌中的特异性第103-120页
 简介第103-104页
 材料和方法第104-106页
 结果第106-109页
  从文昌鱼(B. belcheri)基因组中分离出一个新的MyoD基因并测序第106页
  通过3’RACE 分离文昌鱼AmphiMyoD 基因的cDNA并测序第106页
  基因组序列以及cDNA序列分析第106页
  构建AmphiMyoD-GFP 质粒第106-107页
  文昌鱼(B.belcheri)基因组中含有多个MyoD-类似基因第107-108页
  文昌鱼MyoD 基因的启动子驱动GFP在斑马鱼胚胎的骨骼肌和心肌中表达第108-109页
 讨论第109-120页
第五章:利用酵母双杂交系统通过蛋白质互作筛选影响靶基因活性的基因以及Bop在斑马鱼骨骼肌,心肌中的表达和功能特性第120-158页
 简介第120-122页
 实验材料和方法第122-125页
 结果第125-153页
  pBD-FLH and Cs-MT-FLH 质粒的构建第125页
  pAD-cDNA 噬菌粒文库的制备第125-126页
  利用酵母双杂交分类系统分离基因第126页
  利用双杂交系统验证蛋白-蛋白相互作用第126-128页
  序列分析第128页
  通过TnT 和Co-IP分析Vox和FLH蛋白之间的反应---第128-129页
  分离并分析斑马鱼Bop1 和Bop2 的序列第129-132页
  蛋白序列分析比较不同种属Bop基因蛋白序列第132-135页
  原位杂交分析斑马鱼Bop1 和Bop2 在胚胎中的时间和空间的表达第135-136页
  RT-PCR 分析Bop在斑马鱼胚胎中的时间表达第136-137页
  Hedgehog 信号系统是维持Bop细胞表达需要的第137-139页
  Bop 染色体定位第139页
  MO 设计第139-142页
  分离Bop基因的启动子,构建Bop-GFP第142-144页
  构建不同的表达质粒第144页
  Bop 基因启动子驱动肌肉特异性表达GFP第144-145页
  MO:Bop-E818 降低Bop的表达第145-147页
  降低m Bop的表达没有生肌细胞的特化第147-149页
  降低m Bop的表达抑制成肌细胞的分化第149-150页
  降低Bop的表达通过翻译抑制物MO:Bop-ATG第150页
  证实专一性降低Bop基因表达第150页
  m Bop1 和mBop2 的作用是相互重叠第150-151页
  在mBop表达降低出现的表型不是由于运动神经缺陷造的第151-152页
  在斑马鱼胚胎中异位表达Bop第152页
  异位表达Cs~(2+)-MT-Bop m RNA出现的表型第152-153页
 讨论第153-158页
参考文献第158-190页
结论第190-191页
发表文章第191-192页
致谢第192页

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