中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
引言 | 第10-44页 |
胚胎肌肉发育 | 第10页 |
鱼类肌肉发育 | 第10-12页 |
特化信号 | 第12-30页 |
Hedgehog 信号系统 | 第12-25页 |
Hedgehog 蛋白的生化研究 | 第15-16页 |
Hedgehogs 的表达和功能 | 第16-18页 |
Hh信号的传导 | 第18-25页 |
肌肉发育中的Wnt 信号 | 第25-27页 |
TGF- β信号传导 | 第27-29页 |
Pax | 第28-29页 |
Calcineurin | 第29页 |
NFAT信号的控制 | 第29-30页 |
分化信号 | 第30-44页 |
MyoD家族基因的功能 | 第30-32页 |
MyoD 家族启动子中的调节元件 | 第32-34页 |
Myogenesis 的负调控 | 第34-37页 |
Id | 第34-35页 |
Twist | 第35页 |
MyoR 和mist-1 | 第35页 |
ZEB | 第35-37页 |
Myogenesis 的正调节子 | 第37-39页 |
一般的转录因子 | 第37-38页 |
核激素受体 | 第38-39页 |
转录后调控 | 第39-40页 |
磷酸化-去磷酸化调控 | 第39-40页 |
肌肉基因表达的辅激活因子和MyoD的乙酰化 | 第40页 |
染色体重排 | 第40-41页 |
MyoD 蛋白的稳定化,泛素化,以及降解 | 第41页 |
细胞循环的控制 | 第41-42页 |
P21 | 第41页 |
E2F | 第41-42页 |
成肌因子的进化 | 第42页 |
肌细胞成熟 | 第42-44页 |
第一章.斑马鱼Gli2 蛋白表达;抗体的产生以及在斑马鱼胚胎中的分析 | 第44-63页 |
简介 | 第44-45页 |
材料和方法 | 第45-50页 |
结果 | 第50-62页 |
比较斑马鱼的Gli2 与果蝇的Ci | 第50-51页 |
亲水/疏水性的决定 | 第51-53页 |
构建带有his-标记的重组蛋白以及Myc-标记的蛋白的质粒 | 第53页 |
重组蛋白的产生 | 第53-54页 |
诱导物IPTG 对重组蛋白量的影响 | 第54页 |
时间对重组蛋白产生量的影响 | 第54-55页 |
重组蛋白的可溶性以及其与亲合柱结合效率 | 第55-56页 |
TnT –体外转录翻译系统确定构建质粒的阅读框架 | 第56-57页 |
构建不同启动子驱动的Gli2 | 第57页 |
通过外源表达Gli2 分析抗体 | 第57-58页 |
Western 杂交分析外源表达的Gli2 时间过程 | 第58-59页 |
抗体纯化 | 第59-62页 |
讨论 | 第62-63页 |
第二章 条纹鲈鱼(Striped Bass)肌肉调节因子Myf5 和Myogeni的特性以及肌肉特异性启动子的分析 | 第63-78页 |
简介 | 第63-64页 |
材料和方法 | 第64-66页 |
结果 | 第66-69页 |
从条纹鲈中分离Myf5 和myogenin基因以及其测序 | 第66页 |
条纹鲈Myf5 和myogenin 的序列分析以及其特征 | 第66-67页 |
Myf5 的GFP 及myogenin 的GFP转基因质粒的构建--- | 第67页 |
条纹鲈Myf5 以及myogenin启动子在斑马鱼中驱动肌肉特异性GFP 表达 | 第67-68页 |
条纹鲈和斑马鱼的Myf-5 和myogenin启动子的比较 | 第68页 |
比较斑马鱼和条纹鲈的Myf-5和myogenin基因组序列 | 第68-69页 |
讨论 | 第69-78页 |
第三章:真鲷(Sparus aurata) 快肌和慢肌两个MyoD基因的不同表达 | 第78-103页 |
简介 | 第78-80页 |
材料和方法 | 第80-85页 |
结果 | 第85-103页 |
分离真鲷的MyoD1 和MyoD2 基因组序列 | 第85页 |
基因组序列分析 | 第85页 |
外显子/内含子交界的确定 | 第85页 |
蛋白序列分析 | 第85-86页 |
构建MyoD1-GFP 和MyoD2-GFP 质粒 | 第86页 |
forskolin 处理真鲷胚胎条件的确定 | 第86-87页 |
原位杂交研究真鲷中MyoD1和MyoD2时间及空间表达 | 第87-88页 |
通过RT-PCR 检测MyoD1和MyoD2在真鲷胚胎,以及成体中慢肌以及快肌的分布 | 第88页 |
Forskolin 抑制MyoD1 在真鲷胚胎的近轴层细胞的表达 | 第88页 |
真鲷MyoD1 和MyoD2 的启动子在斑马鱼胚胎中驱动肌肉特异性GFP表达 | 第88-103页 |
第四章:文昌鱼(B. belcheri)中一个新的MyoD基因的进化方向以及其启动子在骨骼肌和心肌中的特异性 | 第103-120页 |
简介 | 第103-104页 |
材料和方法 | 第104-106页 |
结果 | 第106-109页 |
从文昌鱼(B. belcheri)基因组中分离出一个新的MyoD基因并测序 | 第106页 |
通过3’RACE 分离文昌鱼AmphiMyoD 基因的cDNA并测序 | 第106页 |
基因组序列以及cDNA序列分析 | 第106页 |
构建AmphiMyoD-GFP 质粒 | 第106-107页 |
文昌鱼(B.belcheri)基因组中含有多个MyoD-类似基因 | 第107-108页 |
文昌鱼MyoD 基因的启动子驱动GFP在斑马鱼胚胎的骨骼肌和心肌中表达 | 第108-109页 |
讨论 | 第109-120页 |
第五章:利用酵母双杂交系统通过蛋白质互作筛选影响靶基因活性的基因以及Bop在斑马鱼骨骼肌,心肌中的表达和功能特性 | 第120-158页 |
简介 | 第120-122页 |
实验材料和方法 | 第122-125页 |
结果 | 第125-153页 |
pBD-FLH and Cs-MT-FLH 质粒的构建 | 第125页 |
pAD-cDNA 噬菌粒文库的制备 | 第125-126页 |
利用酵母双杂交分类系统分离基因 | 第126页 |
利用双杂交系统验证蛋白-蛋白相互作用 | 第126-128页 |
序列分析 | 第128页 |
通过TnT 和Co-IP分析Vox和FLH蛋白之间的反应--- | 第128-129页 |
分离并分析斑马鱼Bop1 和Bop2 的序列 | 第129-132页 |
蛋白序列分析比较不同种属Bop基因蛋白序列 | 第132-135页 |
原位杂交分析斑马鱼Bop1 和Bop2 在胚胎中的时间和空间的表达 | 第135-136页 |
RT-PCR 分析Bop在斑马鱼胚胎中的时间表达 | 第136-137页 |
Hedgehog 信号系统是维持Bop细胞表达需要的 | 第137-139页 |
Bop 染色体定位 | 第139页 |
MO 设计 | 第139-142页 |
分离Bop基因的启动子,构建Bop-GFP | 第142-144页 |
构建不同的表达质粒 | 第144页 |
Bop 基因启动子驱动肌肉特异性表达GFP | 第144-145页 |
MO:Bop-E818 降低Bop的表达 | 第145-147页 |
降低m Bop的表达没有生肌细胞的特化 | 第147-149页 |
降低m Bop的表达抑制成肌细胞的分化 | 第149-150页 |
降低Bop的表达通过翻译抑制物MO:Bop-ATG | 第150页 |
证实专一性降低Bop基因表达 | 第150页 |
m Bop1 和mBop2 的作用是相互重叠 | 第150-151页 |
在mBop表达降低出现的表型不是由于运动神经缺陷造的 | 第151-152页 |
在斑马鱼胚胎中异位表达Bop | 第152页 |
异位表达Cs~(2+)-MT-Bop m RNA出现的表型 | 第152-153页 |
讨论 | 第153-158页 |
参考文献 | 第158-190页 |
结论 | 第190-191页 |
发表文章 | 第191-192页 |
致谢 | 第192页 |