中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
第一章 绪论 | 第9-13页 |
1.1 利用毛状根培养技术进行次生代谢产物生产的研究概况 | 第9-12页 |
1.2 何首乌组织培养研究概况 | 第12页 |
1.3 立题依据 | 第12-13页 |
第二章 何首乌毛状根的诱导及筛选 | 第13-24页 |
2.1 诱导材料的选择与培养 | 第13-14页 |
2.2 菌种的保藏与活化培养 | 第14-15页 |
2.2.1 培养基组成 | 第14页 |
2.2.2 菌种的活化培养 | 第14-15页 |
2.3 毛状根的诱导 | 第15-16页 |
2.3.1 无菌苗直接感染法 | 第15页 |
2.3.2 接种感染法 | 第15-16页 |
2.4 影响毛状根诱导率的四种因素 | 第16-20页 |
2.4.1 不同诱导方法对毛状根诱导率的影响 | 第16-17页 |
2.4.2 无菌苗不同部位对毛状根的诱导率的影响 | 第17-18页 |
2.4.3 不同外源生长素对毛状根诱导率的影响 | 第18-19页 |
2.4.4 不同菌株对毛状很诱导率的影响 | 第19-20页 |
2.5 毛状根的除菌 | 第20-24页 |
2.5.1 抗生素除菌 | 第21-22页 |
2.5.2 温度除菌 | 第22-24页 |
第三章 何首乌毛状根的鉴定 | 第24-39页 |
3.1 实验材料 | 第25-27页 |
3.2 实验方法 | 第27-34页 |
3.2.1 高压纸电泳 | 第27-28页 |
3.2.2 PCR扩增分析 | 第28-31页 |
3.2.2.1 植物DNA和毛状根DNA的提取 | 第28-29页 |
3.2.2.2 质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
3.2.2.3 引物的选择 | 第30页 |
3.2.2.4 扩增反应步骤 | 第30-31页 |
3.2.3 Southern印迹杂交 | 第31-34页 |
3.2.3.1 原植物、毛状根及质粒DNA的提取 | 第31页 |
3.2.3.2 DNA的限制性内切酶酶解 | 第31页 |
3.2.3.3 琼脂糖凝胶电泳及DNA向尼龙膜的转移 | 第31-32页 |
3.2.3.4 PCR产物的探针标记 | 第32-33页 |
3.2.3.5 杂交、洗膜、显影及探针的去除 | 第33-34页 |
3.3 实验结果 | 第34-37页 |
3.4 实验结论 | 第37-39页 |
第四章 毛状根中蒽醌类化合物的检测 | 第39-47页 |
4.1 蒽醌类化合物的提取 | 第39-40页 |
4.2 蒽醌类化合物的薄层层析定性鉴别 | 第40-41页 |
4.3 蒽醌类化合物的高效液相定量分析 | 第41-47页 |
4.3.1 实验仪器与试剂 | 第41-42页 |
4.3.2 HPLC色谱条件 | 第42页 |
4.3.3 样品溶液的制备 | 第42页 |
4.3.4 标准曲线的制备 | 第42-43页 |
4.3.5 实验结果 | 第43-47页 |
第五章 毛状根液体培养条件的优化及生长动力学考察 | 第47-58页 |
5.1 毛状根液体培养基的选择 | 第47-49页 |
5.2 毛状根液体培养的生长动力学考察 | 第49-57页 |
5.2.1 主要仪器与药品、试剂 | 第49页 |
5.2.2 实验方法 | 第49-53页 |
5.2.2.1 毛状根的液体培养及收获 | 第49-50页 |
5.2.2.2 培养基中残存蔗糖的测定 | 第50-51页 |
5.2.2.3 培养基中NH_4~+的测定 | 第51-52页 |
5.2.2.4 培养基中NO_3~-的测定 | 第52页 |
5.2.2.5 培养基中PO_4~(3-)的测定 | 第52-53页 |
5.2.3 结果与讨论 | 第53-57页 |
5.2.3.1 生长量的累积曲线 | 第53-54页 |
5.2.3.2 蔗糖的消耗代谢曲线 | 第54-55页 |
5.2.3.3 PO_4~(3-)的消耗代谢曲线和pH的变化曲线 | 第55-56页 |
5.2.3.4 NH_4~-和NO_3~-的消耗代谢曲线 | 第56-57页 |
5.3 实验结论 | 第57-58页 |
第六章 结论与讨论 | 第58-64页 |
6.1 结论 | 第58-59页 |
6.2 讨论 | 第59-64页 |
参考文献 | 第64-71页 |
附录 | 第71-73页 |
致谢 | 第73页 |