| 中英文缩略语表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-30页 |
| 1 实验材料 | 第13-14页 |
| ·试剂和材料 | 第13-14页 |
| ·仪器设备 | 第14页 |
| 2 实验方法 | 第14-29页 |
| ·大鼠脂肪干细胞分离和培养 | 第14-15页 |
| ·MTT法检测细胞的增殖情况 | 第15页 |
| ·脂肪干细胞表面分子标志的鉴定(免疫荧光法) | 第15页 |
| ·流式细胞法检测ADSCs表面抗原表达 | 第15-16页 |
| ·含TGF-β1基因的重组腺病毒构建 | 第16-17页 |
| ·TGF-β1基因的扩增和克隆 | 第16页 |
| ·引物设计与合成 | 第16页 |
| ·PCR扩增体系及条件 | 第16页 |
| ·克隆构建 | 第16-17页 |
| ·载体、片段双酶切 | 第16页 |
| ·连接 | 第16-17页 |
| ·转化鉴定 | 第17页 |
| ·筛选克隆 | 第17页 |
| ·腺病毒(Ad)重组质粒制备 | 第17-20页 |
| ·重组质粒pShuttle-IRES-hrGFP-1/TGF-β1小量抽提 | 第17-18页 |
| ·重组质粒pShuttle-IRES-hrGFP-1/TGF-β1酶切 | 第18-20页 |
| ·腺病毒产生和扩增 | 第20页 |
| ·重组腺病毒质粒通过lipofectamine 2000转染AD-293细胞 | 第20页 |
| ·裂解AD-293细胞收获病毒上清 | 第20-21页 |
| ·腺病毒扩增 | 第21页 |
| ·病毒滴度值测定 | 第21页 |
| ·重组腺病毒转染ADSCs | 第21-22页 |
| ·腺病毒感染条件MOI的确定 | 第21-22页 |
| ·病毒转染ADSCs,细胞各项检测 | 第22页 |
| ·腺病毒转染 | 第22页 |
| ·ELISA检测转染后细胞中TGF-β1的表达情况 | 第22页 |
| ·Western blot检测转染后TGF-β1,collagenⅡ的表达情况 | 第22-23页 |
| ·BCA法蛋白定量和SDS-PAGE电泳 | 第23页 |
| ·根据样品蛋白含量向每孔加入等蛋白量的样品 | 第23页 |
| ·膜封闭和抗体孵育 | 第23页 |
| ·结果检测 | 第23页 |
| ·重组腺病毒诱导ADSCs的软骨分化 | 第23页 |
| ·ELISA检测TGF-β1 | 第23-24页 |
| ·提取蛋白 | 第24页 |
| ·BCA法蛋白定量 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第25-26页 |
| ·蛋白转移 | 第26页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR分析基因表达情况 | 第27-28页 |
| ·Alcian blue染色 | 第28页 |
| ·细胞高密度培养和免疫组化 | 第28页 |
| ·石蜡切片免疫组化 | 第28-29页 |
| 3 统计方法 | 第29-30页 |
| 实验结果 | 第30-50页 |
| 1 细胞培养结果 | 第30-34页 |
| ·普通光学显微镜观测细胞形态 | 第30页 |
| ·生长曲线结果 | 第30-31页 |
| ·免疫荧光结果 | 第31页 |
| ·流式细胞仪结果 | 第31-34页 |
| 2. 克隆结果 | 第34-36页 |
| ·克隆构建 | 第34-35页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第35页 |
| ·0.8%琼脂糖凝胶电泳观察酶切结果 | 第35-36页 |
| ·PCR鉴定 | 第36页 |
| 3 腺病毒转染ADSCs结果 | 第36-50页 |
| ·酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·细胞图片 | 第37-38页 |
| ·病毒PCR鉴定 | 第38页 |
| ·病毒滴度值测定 | 第38页 |
| ·共聚焦显微镜观察 | 第38-41页 |
| ·阳性表达率的流式分析 | 第41-42页 |
| ·MTT法检测细胞活力 | 第42-43页 |
| ·克隆形成能力检测 | 第43-44页 |
| ·样品中TGF-β1浓度 | 第44页 |
| ·WB结果 | 第44-45页 |
| ·ELISA检测转染后细胞中TGF-β1的表达情况 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测转染后ADSCs中软骨形成相关基因的表达情况 | 第46-47页 |
| ·GAG含量检测 | 第47-48页 |
| ·细胞免疫组化 | 第48-50页 |
| 讨论分析 | 第50-55页 |
| 结语 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录一:综述 | 第62-78页 |
| 附录二:在读期间科研成果一览 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
