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MADS-box转录因子OsMADS25在水稻根系发育及高盐胁迫响应中的功能研究

中文摘要第3-5页
英文摘要第5-12页
缩略词表第12-13页
1 绪论第13-23页
    1.1 文献综述第13-19页
        1.1.1 MADS-box转录因子结构特征及转录调控第13页
        1.1.2 MADS-box转录因子生物学功能第13-14页
        1.1.3 生长素的合成第14-15页
        1.1.4 生长素的极性运输第15-16页
        1.1.5 生长素信号传导途径第16页
        1.1.6 生长素在植物根系中的作用第16-17页
        1.1.7 植物ROS的生成与清除第17页
        1.1.8 ROS信号转导与非生物胁迫第17-18页
        1.1.9 ROS与植物根系第18-19页
        1.1.10 ROS与植物激素ABA第19页
    1.2 课题的提出及意义第19-20页
    1.3 课题的研究内容、创新点与技术路线第20-23页
        1.3.1 课题的研究内容第20-21页
        1.3.2 技术路线第21页
        1.3.3 课题的创新点第21-23页
2 OsMADS25 在水稻根系发育中的功能研究第23-45页
    2.1 引言第23页
    2.2 材料与方法第23-29页
        2.2.1 材料第23页
        2.2.2 OsMADS25 在水稻中表达模式以及对植物激素和非生物胁迫的响应分析第23-25页
        2.2.3 OsMADS25 基因的克隆第25页
        2.2.4 OsMADS25 超表达载体的构建第25-26页
        2.2.5 OsMADS25-RNAi干扰载体的构建第26-27页
        2.2.6 农杆菌的转化第27-28页
        2.2.7 农杆菌介导水稻遗传转化第28页
        2.2.8 OsMADS25 转基因水稻的阳性鉴定第28-29页
        2.2.9 水稻根系形态参数的测量第29页
        2.2.10 氮营养处理水稻根系第29页
        2.2.11 花粉活力的测定第29页
    2.3 实验结果第29-43页
        2.3.1 OsMADS25 表达模式分析以及对外界信号的响应第29-31页
        2.3.2 OsMADS25 转基因水稻的鉴定以及表型观察第31-35页
        2.3.4 氮营养影响OsMADS25 在水稻根中表达第35-36页
        2.3.5 无氮条件下OsMADS25 对水稻根系的影响第36-38页
        2.3.6 OsMADS25 影响水稻根系对缺氮的适应性第38-40页
        2.3.7 OsMADS25 在土壤中对水稻根系的影响第40-41页
        2.3.8 OsMADS25 对水稻农艺形状的影响第41-43页
    2.4 讨论第43页
    2.5 本章小结第43-45页
3 OsMADS25 通过生长素信号途径调节根系发育第45-65页
    3.1 引言第45页
    3.2 材料与方法第45-52页
        3.2.1 材料第45页
        3.2.2 生长素处理水稻根系第45-46页
        3.2.3 生长素相关基因荧光定量表达分析第46页
        3.2.4 水稻内源生长素含量以及生长素极性运输活性测定第46页
        3.2.5 Chip-seq 实验第46-48页
        3.2.6 EMSA 实验第48-51页
        3.2.7 活体内验证转录因子OsMADS25 结合下游靶基因启动子CArG盒序列第51-52页
    3.3 实验结果与分析第52-63页
        3.3.1 外源生长素能够恢复OsMADS25-RNAi的根系生长发育缺陷第52-54页
        3.3.2 OsMADS25 调节生长素相关基因的表达第54-56页
        3.3.3 OsMADS25 调控的下游靶基因的鉴定与分析第56-58页
        3.3.4 转录因子OsMADS25 直接调控下游靶基因OsIAA第58-61页
        3.3.5 OsMADS25 直接调控下游靶基因OsMADS第61-63页
    3.4 讨论第63-64页
    3.5 本章小节第64-65页
4 OsMADS25 调节水稻体内ROS水平第65-95页
    4.1 引言第65页
    4.2 材料与方法第65-69页
        4.2.1 材料第65页
        4.2.2 NBT和 DAB染色第65-66页
        4.2.3 过氧化氢含量的测定第66页
        4.2.4 PI染色第66页
        4.2.5 酶活测定第66-67页
        4.2.6 EMSA 实验第67页
        4.2.7 酵母单杂交实验第67-68页
        4.2.8 转录因子OsMADS25 结合下游靶基因OsGST4 启动子CArG盒序列第68页
        4.2.9 体外表达OsGST4 蛋白及体外清除ROS活性验证第68-69页
    4.3 结果第69-93页
        4.3.1 OsMADS25 调控水稻主根根尖ROS的水平以及侧根原基的形成第69-71页
        4.3.2 OsMADS25 调控水稻主根成熟区表皮细胞的长度第71-72页
        4.3.3 OsMADS25 改变水稻叶片和苞片内的ROS水平积累第72-74页
        4.3.4 OsMADS25 不影响侧根原基中ROS水平的积累第74-75页
        4.3.5 过表达OsMADS25 提高水稻根系对过氧化氢的耐受性第75-84页
        4.3.6 转录因子OsMADS25 直接调控下游靶基因OsGST第84-87页
        4.3.7 osgst4 突变体的鉴定第87-89页
        4.3.8 OsGST4 的时空表达模式以及在水稻生长发育中的功能第89-90页
        4.3.9 OsGST4 重组蛋白体外具有清除ROS的能力第90-91页
        4.3.10 OsGST4 突变导致水稻体内ROS含量增加第91-93页
    4.4 讨论第93页
    4.5 本章小结第93-95页
5 OsMADS25 依赖于ABA信号途径提高水稻抗盐性第95-115页
    5.1 引言第95页
    5.2 材料与方法第95-97页
        5.2.1 材料第95页
        5.2.2 NBT和 DAB染色第95页
        5.2.3 过氧化氢含量的测定第95页
        5.2.4 酶活的测定第95页
        5.2.5 脯氨酸含量的测定第95页
        5.2.6 丙二醛(MDA)含量的测定第95-96页
        5.2.7 可溶性糖含量的测定第96页
        5.2.8 叶绿素含量的测定第96页
        5.2.9 EMSA 实验第96页
        5.2.10 转录因子OsMADS25 结合下游靶基因OsP5CR启动子CArG盒序列第96页
        5.2.11 水稻原生质体的制备与转化第96-97页
    5.3 结果第97-113页
        5.3.1 盐胁迫条件下过表达OsMADS25 提高水稻种子的萌发率第97-99页
        5.3.2 谷氨酰胺为氮源条件下盐胁迫影响OsMADS25 转基因水稻苗期发育第99-102页
        5.3.3 硝酸盐为氮源条件下盐胁迫影响OsMADS25 转基因水稻苗期发育第102-104页
        5.3.4 超表达OsMADS25 提高水稻根系对ABA的敏感性第104-106页
        5.3.5 ABA改变OsMADS25 转基因水稻体内的ROS含量第106-108页
        5.3.6 OsMADS25 过表达提高水稻在土壤中的耐盐性第108-111页
        5.3.7 转录因子OsMADS25 直接调控下游靶基因OsP5CR第111-113页
    5.4 讨论第113-114页
    5.5 本章小结第114-115页
6 结论与展望第115-119页
    6.1 主要结论第115-117页
    6.2 后续工作与展望第117-119页
参考文献第119-131页
附录第131-141页
    A.作者在攻读博士学位期间发表的论文目录第131-132页
    B.附表第132-139页
    C.学位论文数据集第139-141页
致谢第141-142页

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