| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-25页 |
| ·农药残留检测的重要性及存在问题 | 第9-10页 |
| ·农药残留现状 | 第9页 |
| ·开展农药残留检测的重要性 | 第9-10页 |
| ·农产品农药残留检测工作存在的问题 | 第10页 |
| ·目前农药残留检测的主要方法和手段 | 第10-13页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第10页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第10-11页 |
| ·色-质联用(GC-MS,HPLC-MS) | 第11页 |
| ·超临界流体色谱(SFC) | 第11页 |
| ·薄层色谱法(TLC) | 第11页 |
| ·毛细管电泳(CE) | 第11-12页 |
| ·免疫分析法(IA) | 第12页 |
| ·传感器法 | 第12页 |
| ·速测灵法(金属离子表面皿法) | 第12-13页 |
| ·酶抑制法 | 第13页 |
| ·酶抑制法检测原理及乙酰胆碱酯酶在农药残留检测中的应用 | 第13-15页 |
| ·酶抑制法检测的原理及方法 | 第14-15页 |
| ·乙酰胆碱酯酶在农药残留检测中的应用 | 第15页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的研究进展 | 第15-24页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的分子形式及基因分析 | 第15-16页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的晶体结构 | 第16-17页 |
| ·AChE的功能位点 | 第17-21页 |
| ·AChE突变对昆虫抗药性的影响 | 第21-22页 |
| ·AChE分子生物学在临床医学和环境检测上中的应用 | 第22-23页 |
| ·AChE的制备 | 第23-24页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第24-25页 |
| 2 实验材料与方法 | 第25-34页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·组织、菌株和质粒 | 第25页 |
| ·化学试剂及抗菌素 | 第25页 |
| ·常用贮存液 | 第25页 |
| ·限制性内切酶及其它工具酶 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·常用缓冲液 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·昆明鼠脑组织RNA的提取——Trizol法 | 第27页 |
| ·昆明鼠脑组织AChE cDNA的合成——两步法RT-PCR | 第27-29页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第29页 |
| ·DNA片段的回收和连接 | 第29页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备和转化 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·互补法筛选阳性克隆 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·蛋白质的原核表达 | 第32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第32页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的活性测定 | 第33-34页 |
| 3 实验结果与分析 | 第34-42页 |
| ·鼠脑总RNA的提取 | 第34页 |
| ·RT-PCR扩增鼠脑组织AChE | 第34页 |
| ·重组克隆载体pMD-ace的构建 | 第34-35页 |
| ·重组克隆载体pMD-ace的鉴定 | 第35-36页 |
| ·鼠脑AChE cDNA的测序结果与分析 | 第36-38页 |
| ·鼠脑AChE cDNA重组表达载体pET-ace的构建及鉴定 | 第38-40页 |
| ·昆明鼠脑AChE cDNA在E.coli中的表达 | 第40-41页 |
| ·昆明鼠脑AChE活性测定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
