诺卡氏菌腈水合酶和蜡状芽孢杆菌酰胺酶的分离纯化和酶学特性研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-35页 |
| ·前言 | 第13-14页 |
| ·腈水合酶 | 第14-21页 |
| ·腈水合酶的种类及来源 | 第14-16页 |
| ·腈水合酶的反应机理 | 第16-17页 |
| ·腈水合酶的立体选择性 | 第17页 |
| ·影响腈水合酶活性的主要因素 | 第17-20页 |
| ·腈水合酶在化工产业中的应用 | 第20页 |
| ·腈水合酶的分离纯化的研究现状 | 第20-21页 |
| ·酰胺酶 | 第21-28页 |
| ·酰胺酶的分类及来源 | 第21-24页 |
| ·酰胺酶的反应机理 | 第24-25页 |
| ·酰胺酶的立体选择性 | 第25页 |
| ·影响酰胺酶活性的主要因素 | 第25-26页 |
| ·酰胺酶在化学中间合成工业中的应用 | 第26-28页 |
| ·酰胺酶的分离纯化的研究现状 | 第28页 |
| ·本课题研究背景、内容及意义 | 第28-30页 |
| ·研究背景 | 第28-29页 |
| ·研究内容 | 第29页 |
| ·研究意义 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二章 诺卡氏菌腈水合酶的分离纯化研究 | 第35-57页 |
| ·材料与方法 | 第36-45页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| ·主要实验试剂 | 第36-37页 |
| ·菌种及培养方法 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度测定(考马斯亮蓝法) | 第37-38页 |
| ·腈水合酶的活力测定方法 | 第38-39页 |
| ·腈水合酶粗酶液的提取条件优化 | 第39页 |
| ·硫酸铵分级盐析过程的优化 | 第39-40页 |
| ·强碱性阴离子交换层析过程的优化 | 第40-41页 |
| ·疏水相互作用层析 | 第41-42页 |
| ·电泳 | 第42-44页 |
| ·电泳转 PVDF膜(湿转) | 第44-45页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-55页 |
| ·蛋白质标准曲线 | 第45-46页 |
| ·菌体破碎条件的优化 | 第46-49页 |
| ·硫酸铵分级盐析过程的优化 | 第49-50页 |
| ·阴离子交换层析洗脱条件研究 | 第50-53页 |
| ·疏水相互作用层析 | 第53-54页 |
| ·腈水合酶的分离纯化检测结果及分析 | 第54页 |
| ·SDS凝胶电泳 | 第54-55页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第三章 诺卡氏菌腈水合酶的酶学特性研究 | 第57-67页 |
| ·材料和方法 | 第57-58页 |
| ·主要实验仪器和实验试剂 | 第57页 |
| ·菌种培养方法和酶活分析方法 | 第57页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第57页 |
| ·腈水合酶的酶学特性考察 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-65页 |
| ·pH对腈水合酶酶活的影响 | 第58-59页 |
| ·不同pH下腈水合酶的稳定性研究 | 第59-60页 |
| ·腈水合酶的最适反应温度研究 | 第60页 |
| ·腈水合酶酶的热稳定性(半衰期)研究 | 第60-62页 |
| ·各种金属离子与化学试剂对腈水合酶的影响 | 第62-63页 |
| ·底物浓度对腈水合酶活性的影响 | 第63-64页 |
| ·底物特异性研究 | 第64页 |
| ·腈水合酶的动力学常数的测定 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第四章 蜡状芽孢杆菌酰胺酶的分离纯化研究 | 第67-79页 |
| ·材料与方法 | 第67-70页 |
| ·主要实验仪器 | 第67页 |
| ·主要实验试剂 | 第67页 |
| ·菌种及培养方法 | 第67-68页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第68页 |
| ·酰胺酶的活力 | 第68页 |
| ·酰胺酶粗酶液的提取条件优化 | 第68-69页 |
| ·强碱性阴离子交换层析过程的优化 | 第69页 |
| ·疏水相互作用层析 | 第69页 |
| ·电泳 | 第69页 |
| ·电泳转 PVDF膜(湿转) | 第69-70页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-78页 |
| ·菌体破碎条件的优化 | 第70-72页 |
| ·阴离子交换层析洗脱条件研究 | 第72-75页 |
| ·疏水相互作用层析 | 第75-76页 |
| ·酰胺酶分离纯化检测结果及分析 | 第76页 |
| ·SDS凝胶电泳 | 第76-77页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 第五章 蜡状芽孢杆菌酰胺酶的酶学特性研究 | 第79-89页 |
| ·材料和方法 | 第79-81页 |
| ·主要实验仪器 | 第79页 |
| ·主要实验试剂 | 第79页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第79页 |
| ·酰胺酶的酶学特性考察 | 第79-81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-87页 |
| ·pH对酰胺酶酶活的影响 | 第81页 |
| ·不同pH下酰胺酶的稳定性研究 | 第81-82页 |
| ·酰胺酶的最适反应温度研究 | 第82-83页 |
| ·酰胺酶的热稳定性(半衰期)研究 | 第83-84页 |
| ·各种金属离子与化学试剂对酰胺酶的影响 | 第84-85页 |
| ·底物浓度对酰胺酶活性的影响 | 第85页 |
| ·底物特异性研究 | 第85-86页 |
| ·酰胺酶的基本动力学常数的测定 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87页 |
| 参考文献 | 第87-89页 |
| 第六章 总结与建议 | 第89-91页 |
| ·本论文的主要结论 | 第89-90页 |
| ·本论文的展望 | 第90-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士期间发表的论文和专著 | 第94页 |
