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耐辐射球菌DNA损伤修复关键基因ddrB和recO的功能研究

致谢第1-7页
中文摘要第7-9页
英文摘要第9-11页
缩略词第11-12页
目录第12-16页
第一章 文献综述第16-45页
   ·耐辐射球菌第16页
   ·其他耐辐射的细菌第16-17页
   ·耐辐射球菌的基因组第17页
   ·耐辐射球菌基因组和DNA损伤修复第17-20页
   ·耐辐射球菌辐射抗性可能的机制第20-30页
     ·辐射抗性的影响因素第20-22页
     ·可能的修复机理第22-30页
   ·耐辐射球菌主要修复蛋白的研究进展第30-36页
   ·课题研究的目的和意义第36-37页
   ·主要研究的内容第37页
 参考文献第37-45页
第二章 耐辐射球菌ddrB的体内功能分析第45-61页
 1.前言第45-46页
 2.材料与方法第46-51页
   ·菌株和质粒第46页
   ·主要试剂第46页
   ·主要仪器第46页
   ·耐辐射球菌(D.radiodurans)基因组DNA的制备第46页
   ·质粒DNA的制备和DNA片段的回收第46-47页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备第47页
   ·细胞的转化第47页
   ·耐辐射球菌转化和突变株的构建第47-48页
   ·耐辐射球菌转化第48页
   ·突变株的鉴定第48-49页
   ·ddrB补偿质粒和ddrB补偿菌株的构建第49页
   ·辐射条件下突变株的生存率测定第49页
   ·H_2O_2氧化压力下突变株的生存率测定第49页
   ·耐辐射球菌脉冲场电泳基因组制备流程第49-50页
   ·耐辐射球菌脉冲场电泳(PFGE)流程第50-51页
 3.结果与分析第51-58页
   ·突变株的构建第51-53页
   ·ddrB补偿株的构建第53-54页
   ·γ辐射和H_2O_2处理对ddrB突变株生存率的影响第54-56页
   ·修复动力学第56-58页
 4.讨论第58-59页
 参考文献第59-61页
第三章 耐辐射球菌DdrB体外功能研究第61-90页
 1.前言第61页
 2.材料与方法第61-69页
   ·材料第61页
   ·菌株与质粒第61-62页
   ·ddrB表达质粒的构建第62页
   ·DdrB蛋白的表达第62-63页
   ·DdrB蛋白的纯化第63页
   ·蛋白和核酸第63-64页
   ·蛋白交联试验第64页
   ·DdrB结合活性的测定第64-65页
   ·荧光滴度试验第65页
   ·DdrB双链DNA保护试验第65-66页
   ·单链退火活性的测试第66-67页
     ·DdrB蛋白的单链退火活性第66页
     ·荧光分光光度计的方法测定退火活性第66-67页
     ·部分单链的双链DNA和环状单链DNA的退火第67页
   ·蛋白体外互作实验第67-68页
   ·Pull-down实验第68页
   ·仪器与设备第68-69页
 3.结果第69-83页
   ·DdrB蛋白的表达与纯化第69-71页
   ·DdrB与核酸的结合活性第71-75页
   ·DdrB蛋白具有dsDNA保护功能第75-76页
   ·DdrB促进ssDNA的退火第76-79页
   ·DdrB与SSB_(Dr)蛋白可以在体外相互作用第79-81页
   ·DdrB和SSB_(Dr)协同地与ssDNA结合第81-83页
 4.讨论第83-85页
 参考文献第85-90页
第四章 修复关键基因RecO的功能研究第90-107页
 1.前言第90-91页
 2.材料与方法第91-94页
   ·菌株与质粒第91页
   ·突变的构建第91-92页
   ·突变株的鉴定第92页
   ·生长曲线测定第92-93页
   ·recO补偿株的构建第93页
   ·表型分析第93-94页
     ·γ-射线辐照试验第93-94页
     ·UV处理试验第94页
   ·脉冲场电泳(PFGE)第94页
 3.结果与分析第94-101页
   ·recO突变株的鉴定第94-96页
     ·recO突变株对γ辐射和UV非常敏感第96-97页
   ·大肠杆菌的recO同源基因只可以部分补偿recO突变第97-99页
   ·修复动力学第99-101页
 4.讨论第101-103页
 参考文献第103-107页
结论第107-109页
作者简历第109页

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