致谢 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
缩略词 | 第11-12页 |
目录 | 第12-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-45页 |
·耐辐射球菌 | 第16页 |
·其他耐辐射的细菌 | 第16-17页 |
·耐辐射球菌的基因组 | 第17页 |
·耐辐射球菌基因组和DNA损伤修复 | 第17-20页 |
·耐辐射球菌辐射抗性可能的机制 | 第20-30页 |
·辐射抗性的影响因素 | 第20-22页 |
·可能的修复机理 | 第22-30页 |
·耐辐射球菌主要修复蛋白的研究进展 | 第30-36页 |
·课题研究的目的和意义 | 第36-37页 |
·主要研究的内容 | 第37页 |
参考文献 | 第37-45页 |
第二章 耐辐射球菌ddrB的体内功能分析 | 第45-61页 |
1.前言 | 第45-46页 |
2.材料与方法 | 第46-51页 |
·菌株和质粒 | 第46页 |
·主要试剂 | 第46页 |
·主要仪器 | 第46页 |
·耐辐射球菌(D.radiodurans)基因组DNA的制备 | 第46页 |
·质粒DNA的制备和DNA片段的回收 | 第46-47页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
·细胞的转化 | 第47页 |
·耐辐射球菌转化和突变株的构建 | 第47-48页 |
·耐辐射球菌转化 | 第48页 |
·突变株的鉴定 | 第48-49页 |
·ddrB补偿质粒和ddrB补偿菌株的构建 | 第49页 |
·辐射条件下突变株的生存率测定 | 第49页 |
·H_2O_2氧化压力下突变株的生存率测定 | 第49页 |
·耐辐射球菌脉冲场电泳基因组制备流程 | 第49-50页 |
·耐辐射球菌脉冲场电泳(PFGE)流程 | 第50-51页 |
3.结果与分析 | 第51-58页 |
·突变株的构建 | 第51-53页 |
·ddrB补偿株的构建 | 第53-54页 |
·γ辐射和H_2O_2处理对ddrB突变株生存率的影响 | 第54-56页 |
·修复动力学 | 第56-58页 |
4.讨论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-61页 |
第三章 耐辐射球菌DdrB体外功能研究 | 第61-90页 |
1.前言 | 第61页 |
2.材料与方法 | 第61-69页 |
·材料 | 第61页 |
·菌株与质粒 | 第61-62页 |
·ddrB表达质粒的构建 | 第62页 |
·DdrB蛋白的表达 | 第62-63页 |
·DdrB蛋白的纯化 | 第63页 |
·蛋白和核酸 | 第63-64页 |
·蛋白交联试验 | 第64页 |
·DdrB结合活性的测定 | 第64-65页 |
·荧光滴度试验 | 第65页 |
·DdrB双链DNA保护试验 | 第65-66页 |
·单链退火活性的测试 | 第66-67页 |
·DdrB蛋白的单链退火活性 | 第66页 |
·荧光分光光度计的方法测定退火活性 | 第66-67页 |
·部分单链的双链DNA和环状单链DNA的退火 | 第67页 |
·蛋白体外互作实验 | 第67-68页 |
·Pull-down实验 | 第68页 |
·仪器与设备 | 第68-69页 |
3.结果 | 第69-83页 |
·DdrB蛋白的表达与纯化 | 第69-71页 |
·DdrB与核酸的结合活性 | 第71-75页 |
·DdrB蛋白具有dsDNA保护功能 | 第75-76页 |
·DdrB促进ssDNA的退火 | 第76-79页 |
·DdrB与SSB_(Dr)蛋白可以在体外相互作用 | 第79-81页 |
·DdrB和SSB_(Dr)协同地与ssDNA结合 | 第81-83页 |
4.讨论 | 第83-85页 |
参考文献 | 第85-90页 |
第四章 修复关键基因RecO的功能研究 | 第90-107页 |
1.前言 | 第90-91页 |
2.材料与方法 | 第91-94页 |
·菌株与质粒 | 第91页 |
·突变的构建 | 第91-92页 |
·突变株的鉴定 | 第92页 |
·生长曲线测定 | 第92-93页 |
·recO补偿株的构建 | 第93页 |
·表型分析 | 第93-94页 |
·γ-射线辐照试验 | 第93-94页 |
·UV处理试验 | 第94页 |
·脉冲场电泳(PFGE) | 第94页 |
3.结果与分析 | 第94-101页 |
·recO突变株的鉴定 | 第94-96页 |
·recO突变株对γ辐射和UV非常敏感 | 第96-97页 |
·大肠杆菌的recO同源基因只可以部分补偿recO突变 | 第97-99页 |
·修复动力学 | 第99-101页 |
4.讨论 | 第101-103页 |
参考文献 | 第103-107页 |
结论 | 第107-109页 |
作者简历 | 第109页 |