| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 第一部分 引言 | 第12-23页 |
| 1 甜瓜果实糖分积累特点 | 第12页 |
| 2 甜瓜蔗糖代谢相关酶在蔗糖代谢中的作用 | 第12-14页 |
| 3 蔗糖磷酸合成酶的研究进展 | 第14-19页 |
| ·SPS 的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·SPS 在蔗糖代谢中的作用 | 第15-17页 |
| ·SPS影响源强和库强 | 第15页 |
| ·SPS调节光合产物在蔗糖和淀粉之间的分配 | 第15页 |
| ·SPS是合成蔗糖的关键酶之一 | 第15-16页 |
| ·SPS 可提高瓜果的品质 | 第16页 |
| ·SPS 参与细胞分化与纤维细胞壁合成 | 第16-17页 |
| ·SPS 基因研究现状及应用 | 第17-19页 |
| ·SPS 基因的表达调控 | 第17-18页 |
| ·SPS 基因的克隆及遗传转化植株的表现 | 第18-19页 |
| 4 反义技术的研究 | 第19-22页 |
| ·反义技术的概念及作用原理 | 第19-20页 |
| ·反义核酸技术在植物基因工程中的应用 | 第20-22页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 甜瓜果实蔗糖代谢相关酶基因的克隆及表达分析 | 第23-49页 |
| 1 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·试验材料、试剂及试验仪器 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-38页 |
| ·甜瓜果实总RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·甜瓜果实SPS 基因的克隆 | 第24-26页 |
| ·甜瓜果实 AI 基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·转化 | 第28-29页 |
| ·重组子的PCR及酶切鉴定 | 第29-31页 |
| ·测序及序列分析 | 第31页 |
| ·CmSPS1 和 CmS-AIV1 的表达特性分析 | 第31-36页 |
| ·甜瓜果实生长发育过程中蔗糖含量及SPS 和AI 活性的变化 | 第36-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-46页 |
| ·甜瓜果实总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·甜瓜果实SPS 基因的克隆 | 第38-40页 |
| ·甜瓜果实SPS 基因中间片段的克隆 | 第38-39页 |
| ·甜瓜果实SPS 基因3′端的克隆 | 第39页 |
| ·甜瓜果实SPS 基因5′端的克隆 | 第39-40页 |
| ·CmSPS1 氨基酸序列分析及同源性比较 | 第40-41页 |
| ·甜瓜果实 AI 基因 5′ 端及 3′ 端的克隆 | 第41页 |
| ·CmS-AIV1氨基酸序列分析及同源性比较 | 第41-42页 |
| ·CmSPS1 和 CmS-AIV1 的表达特性分析 | 第42-44页 |
| ·CmSPS1 基因在甜瓜不同组织中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·CmSPS1 基因在甜瓜果实生长发育过程中的表达特性分析 | 第43页 |
| ·CmS-AIV1基因在甜瓜不同组织中的表达分析 | 第43-44页 |
| ·CmS-AIV1基因在甜瓜果实生长发育过程中的表达特性分析 | 第44页 |
| ·甜瓜果实生长发育过程中蔗糖含量及SPS 和AI 活性的变化 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·关于甜瓜总 RNA 的提取 | 第46页 |
| ·RT-PCR 反应条件的优化 | 第46-47页 |
| ·RACE 技术在基因克隆中的作用及引物设计原则 | 第47-49页 |
| 第三部分 甜瓜果实 CmSPS1 反义表达载体的构建及反义转基因植株的获得 | 第49-65页 |
| 1 试验材料与方法 | 第49-58页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·菌种与质粒 | 第49页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·分子生物学与生化试剂 | 第49页 |
| ·35S 启动子和 TNOS 终止子引物的合成 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-58页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第50-51页 |
| ·表达载体pROK2 的酶切反应及所得片段的回收 | 第51页 |
| ·连接反应 | 第51-52页 |
| ·热激法转化E.coli DH5a | 第52页 |
| ·重组质粒的筛选及菌液的保存 | 第52页 |
| ·重组质粒的鉴定方法 | 第52-53页 |
| ·子房注射法转化甜瓜 | 第53页 |
| ·筛选转基因阳性植株 | 第53-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-62页 |
| ·利用PCR验证重组质粒 | 第58页 |
| ·利用酶切进行鉴定 | 第58-59页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第59-62页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·PCR Southern Blot鉴定 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| ·关于酶切和连接 | 第62页 |
| ·关于标记基因的切除 | 第62-63页 |
| ·关于反义技术在植物基因工程中的应用 | 第63页 |
| ·子房注射法在甜瓜转基因上的应用 | 第63-64页 |
| ·PCR 法在鉴定转基因植株中的应用 | 第64-65页 |
| 第四部分 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第78页 |
