| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述及课题背景介绍 | 第7-14页 |
| ·EGR-1 简介 | 第7-9页 |
| ·概述 | 第7页 |
| ·EGR1 在前列腺肿瘤中的表达 | 第7-8页 |
| ·EGR1 小鼠模型和前列腺肿瘤 | 第8-9页 |
| ·IL-8 与肿瘤 | 第9-14页 |
| ·IL-8 概述 | 第9-10页 |
| ·IL-8 信号通路 | 第10-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-38页 |
| ·质粒构建 | 第14-19页 |
| ·溶液配方 | 第14-15页 |
| ·Si-RNA-EGR-1 克隆构建 | 第15-18页 |
| ·IL-8 promoter pGL-3 报告基因质粒构建 | 第18-19页 |
| ·细胞培养和转染 | 第19-22页 |
| ·溶液配方 | 第19-20页 |
| ·细胞复苏 | 第20页 |
| ·细胞传代 | 第20页 |
| ·细胞的冻存 | 第20-21页 |
| ·转染肿瘤细胞DU145 | 第21页 |
| ·Stealth~(TM) RNAi or siRNA 转染 | 第21-22页 |
| ·WESTERN BLOTTING | 第22-24页 |
| ·溶液配方 | 第22-24页 |
| ·Protocol | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-27页 |
| ·细胞中总 RNA 提取: | 第24-25页 |
| ·RNA 电泳(检测 RNA 的质量) | 第25页 |
| ·RT 反应: | 第25-26页 |
| ·PCR for EGR-1 and 1851RNA | 第26-27页 |
| ·报告基因分析 | 第27-28页 |
| ·CHIP | 第28-30页 |
| ·溶液配方 | 第28页 |
| ·Protocol | 第28-30页 |
| ·PCR for the IL-8-promoter-NF-kB-like binding site | 第30页 |
| ·免疫荧光 | 第30-31页 |
| ·基本原理 | 第30-31页 |
| ·免疫荧光操作步骤 | 第31页 |
| ·ELISA | 第31-32页 |
| ·原理与类型 | 第31-32页 |
| ·免疫共沉淀(CO-IP) | 第32-33页 |
| ·TUMOR COLONY FORMATION ASSAY | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·实验步骤 | 第33页 |
| ·CELL INVASION ASSAY | 第33-38页 |
| ·需要的试剂和溶液 | 第33-35页 |
| ·实验操作示意图 | 第35页 |
| ·操作步骤 | 第35-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-49页 |
| ·前列腺肿瘤细胞中稳定敲低EGR-1 的表达后会降低IL-8 的表达 | 第38-40页 |
| ·前列腺肿瘤细胞DU145 中稳定转染SI-RNA-EGR-1 质粒后，IL-8 的MRNA 水平和分泌到胞外的蛋白水平均有显著降低 | 第38页 |
| ·前列腺肿瘤细胞PC3 中稳定转染pcDNA-EGR-1 质粒后 I，L-8 的mRNA 水平和分泌到胞外的蛋白水平均有显著上升 | 第38-39页 |
| ·HEK293 和HeLa 细胞中敲低EGR-1 也会降低细胞中IL-8 的水平 | 第39-40页 |
| ·EGR-1 对IL-8 的调控是通过IL-8 启动子上的NF-KB 位点来实现的 | 第40-42页 |
| ·IL-8 启动子分析 | 第40-41页 |
| ·DU145 细胞中IL-8 promoter luciferase 分析 | 第41页 |
| ·PC3 细胞中IL-8 promoter luciferase 分析 | 第41-42页 |
| ·EGR-1 可以通过与转录因子NF-KB 通过蛋白-蛋白相互作用形成蛋白复合物结合到IL-8 启动子上的NF-KB 位点上 | 第42-44页 |
| ·EGR-1 可以结合到IL-8 promoter 上NF-kB 位点上 | 第42-43页 |
| ·EGR-1 结合到IL-8 启动子区域是依赖于NF-kB 的 | 第43页 |
| ·EGR-1 可以在细胞内与NF-kB 相互作用形成蛋白复合物 | 第43页 |
| ·前列腺肿瘤细胞中EGR-1 表达水平的变化对NF-kB 信号通路没有影响 | 第43-44页 |
| ·沉默细胞内EGR-1 的表达会阻断EGR-1/NF-KB 复合物的形成 | 第44-45页 |
| ·敲低细胞内EGR-1 的表达可以抑制肿瘤细胞的克隆形成和浸润能力 | 第45-47页 |
| ·敲低细胞中EGR-1 表达后会抑制IL-8 的表达从而抑制细胞的肿瘤克隆形成 | 第45页 |
| ·敲低细胞中EGR-1 表达后会抑制IL-8 的表达从而抑制肿瘤细胞的浸润 | 第45-47页 |
| ·其他生长因子与肿瘤细胞浸润的关系 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
