| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·蚯蚓纤溶酶的研究进展 | 第10-12页 |
| ·血栓疾病及溶栓药物的开发 | 第10页 |
| ·蚯蚓纤溶酶 | 第10-12页 |
| ·蚯蚓纤溶酶基因的表达研究 | 第12页 |
| ·植物转基因技术 | 第12-13页 |
| ·农杆菌介导的番茄遗传转化研究 | 第13-17页 |
| ·番茄的基因工程研究进展 | 第13-14页 |
| ·农杆菌转化机理 | 第14-16页 |
| ·影响番茄转化的因素 | 第16-17页 |
| ·转基因植物的检测技术 | 第17-19页 |
| ·转基因植物的检测方法 | 第17-18页 |
| ·蚯蚓纤溶酶活性的检测方法 | 第18-19页 |
| ·转基因沉默 | 第19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·PCR引物设计 | 第20页 |
| ·菌株及载体 | 第20-21页 |
| ·试剂、溶液和培养基配方 | 第21-22页 |
| ·重组质粒PF和PEF的鉴定 | 第22-25页 |
| ·碱裂解法中量提取制备质粒DNA | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第23页 |
| ·EFE和E8基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·质粒酶切鉴定体系 | 第24页 |
| ·三亲交配法将中间载体导入农杆菌 | 第24-25页 |
| ·农杆菌介导的番茄的遗传转化 | 第25-27页 |
| ·番茄无菌苗和再生苗的获得 | 第25页 |
| ·抗生素敏感浓度的选择 | 第25页 |
| ·目的基因转化 | 第25-26页 |
| ·试管苗的移栽和培养 | 第26-27页 |
| ·转基因苗的检测和鉴定 | 第27-30页 |
| ·基因组水平初步检测转基因苗 | 第27页 |
| ·酪蛋白平板法检测转基因苗的EFE活性 | 第27-28页 |
| ·转基因苗转录水平的检测 | 第28-30页 |
| 第3章 结果与分析 | 第30-38页 |
| ·目的基因转化结果 | 第30-32页 |
| ·质粒pF和pEF的鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·三亲交配法将目的基因导入农杆菌 | 第31页 |
| ·农杆菌质粒重导入大肠杆菌并鉴定 | 第31-32页 |
| ·转基因番茄的组织培养 | 第32-33页 |
| ·抗性敏感性试验结果 | 第32页 |
| ·转化愈伤组织不定芽与根的生长 | 第32-33页 |
| ·再生番茄幼苗移栽出来的生长 | 第33页 |
| ·再生番茄苗开花期和坐果期的生长 | 第33页 |
| ·转化的番茄植株的检测与鉴定 | 第33-38页 |
| ·转基因番茄的初步检测 | 第33-35页 |
| ·酪蛋白平板法检测结果 | 第35-36页 |
| ·半定量RT-PCR检测结果 | 第36-38页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·使用抗生素浓度确定 | 第38页 |
| ·番茄总RNA提取 | 第38页 |
| ·表达产物的活性 | 第38-39页 |
| ·pF载体和pEF载体对结果产生的不同影响 | 第39页 |
| ·结论 | 第39-40页 |
| ·建立起一套番茄组织培养和目的基因转化的体系 | 第39页 |
| ·得到阳性转基因植株,初步检测表明部分植株果实表现出一定的EFE活性 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 附图 | 第46-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52页 |