| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 研究背景 | 第9-23页 |
| ·口蹄疫病毒的概况 | 第9-11页 |
| ·口蹄疫历史 | 第9-10页 |
| ·口蹄疫的流行现状及危害 | 第10-11页 |
| ·口蹄疫的研究进展 | 第11-17页 |
| ·口蹄疫病毒的基本特点 | 第11页 |
| ·口蹄疫病毒基因组结构 | 第11-17页 |
| 一 口蹄疫基因组5′端UTR的功能 | 第12-13页 |
| 二 开放阅读框 | 第13-16页 |
| 1 L区(leader proteinase) | 第13-14页 |
| 2 P1区 | 第14-15页 |
| 3 P2区 | 第15页 |
| 4 P3区 | 第15-16页 |
| 三 3′非编码区 | 第16-17页 |
| ·FMDV重组蛋白亚单位疫苗研究进展 | 第17-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第17-18页 |
| ·酵母表达系统 | 第18-19页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第20-21页 |
| ·转基因植物表达系统 | 第21-23页 |
| 第二章 O型口蹄疫结构蛋白编码基因的克隆和表达载体的构建 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳的相关试剂 | 第23-24页 |
| ·设备与仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·目的基因克隆载体的构建 | 第24-29页 |
| 一 引物设计与合成 | 第24页 |
| 二 病毒RNA的提取 | 第24-25页 |
| 三 FMDV RNA的反转录 | 第25-26页 |
| 四 FMDV VP0、VP1、VP3基因进行PCR扩增 | 第26页 |
| 五 PCR产物的纯化、回收 | 第26-27页 |
| 六 PCR纯化产物与pGEM-T Easy载体连接 | 第27页 |
| 七 转化感受态细胞 | 第27-28页 |
| 八 重组克隆载体的鉴定 | 第28-29页 |
| 1 PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2 酶切鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因重组表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 一 TA阳性克隆质粒和pET-32a(+)质粒的双酶切 | 第29-30页 |
| 二 pET-32a(+)分别与FMDV VP0、VP1及VP3连接 | 第30页 |
| 三 转化 | 第30-31页 |
| 四 鉴定阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-37页 |
| ·FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3基因的克隆、鉴定 | 第32-35页 |
| ·pET32a+/VP0、pET32a+/VP1、pET32a+/VP3的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白B细胞表位分析 | 第39-45页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白B细胞表位分析 | 第39页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白亲水性参数 | 第39页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白可塑性分析 | 第39页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白抗原性指数分析 | 第39页 |
| ·各种结构蛋白的B细胞表位分析的结果 | 第39-43页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白亲水性 | 第39-40页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白可塑性 | 第40-42页 |
| ·O型结构蛋白VP0、VP1、VP3蛋白抗原表位预测 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 FMDV VP0、VP1、VP3蛋白在大肠杆菌表达条件的摸索 | 第45-52页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·培养基与诱导表达的相关试剂 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器与设备 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·目的蛋白(VPO、VP1、VP3蛋白)表达条件的确定 | 第46-47页 |
| ·包涵体表达形式的确定 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-50页 |
| ·目的蛋白表达的SDS-PAGE结果 | 第48-50页 |
| ·目的蛋白VP0、VP1、VP3表达形式的确定 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 口蹄疫结构蛋白VP0、VP1、VP3的纯化与复性研究 | 第52-63页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·包涵体洗涤与溶解的相关试剂 | 第52页 |
| ·包涵体复性相关试剂 | 第52-53页 |
| ·蛋白透析复性所需的试剂 | 第53页 |
| ·Western blot所需要试剂的配制 | 第53页 |
| ·蛋白质浓度测定所需的试剂 | 第53页 |
| ·仪器与设备 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-58页 |
| ·包涵体的洗涤与纯化 | 第53-54页 |
| ·用亲和层析法纯化目的蛋白 | 第54-55页 |
| ·透析复性的过程 | 第55页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第55-56页 |
| ·动物免疫实验 | 第56页 |
| ·Western blot分析目的蛋白的表达 | 第56-57页 |
| ·双抗夹心ELISA检测 | 第57-58页 |
| ·实验结果 | 第58-61页 |
| ·纯化后蛋白12%SDS-PAGE | 第58-59页 |
| ·蛋白浓度测定后的结果 | 第59页 |
| ·Westernblot检测复性后的蛋白 | 第59-61页 |
| ·双抗夹心ELISA检测 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 表论文情况硕士在读期间发 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
