| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| ·猪瘟病毒研究进展 | 第15-24页 |
| ·猪瘟简介 | 第15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·猪瘟病毒的分子生物学特性 | 第16-24页 |
| ·猪瘟诊断方法的研究进展 | 第24-27页 |
| ·血清学诊断技术 | 第24-26页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第26-27页 |
| ·猪瘟的免疫预防 | 第27页 |
| ·猪瘟疫苗的研究进展 | 第27-30页 |
| ·猪瘟病毒传统疫苗的研究 | 第27-28页 |
| ·猪瘟病毒新型疫苗的研究 | 第28-30页 |
| ·开展本论文研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 DNA疫苗研究进展 | 第32-38页 |
| ·概述 | 第32页 |
| ·DNA疫苗作用机制 | 第32-33页 |
| ·增强DNA疫苗免疫效果 | 第33-36页 |
| ·免疫方式及途径的优化对DNA疫苗的增强作用 | 第33-34页 |
| ·质粒载体序列的优化对DNA疫苗的增强作用 | 第34-36页 |
| ·细胞因子佐剂对DNA疫苗的增强作用 | 第36-37页 |
| ·IL-2 | 第36页 |
| ·IL-12 | 第36页 |
| ·GM-CSF | 第36-37页 |
| ·展望 | 第37-38页 |
| 第三章 抗猪瘟病毒单基因及双基因融合DNA疫苗的初步研究 | 第38-79页 |
| ·材料和实验动物 | 第38-43页 |
| ·载体、病毒和细胞 | 第38页 |
| ·血清与二抗 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第39-42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-58页 |
| ·猪瘟病毒基因组RNA的提取和RT-PCR | 第43页 |
| ·引物的设计 | 第43-44页 |
| ·目的基因的扩增 | 第44-47页 |
| ·重组质粒DNA的构建操作 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·质粒的转化 | 第48-49页 |
| ·质粒的小量制备 | 第49页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第49页 |
| ·细胞传代培养 | 第49-50页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第50页 |
| ·脂质体介导的真核细胞转染 | 第50-51页 |
| ·细胞接毒 | 第51页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒在PK-15细胞中的瞬时表达 | 第51页 |
| ·间接免疫荧光检测目的蛋白表达 | 第51-52页 |
| ·Western Blot检测目的蛋白表达 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第53-54页 |
| ·动物DNA免疫接种 | 第54页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的测定 | 第54-55页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第55页 |
| ·免疫小鼠IFN-γ水平的测定 | 第55-56页 |
| ·免疫猪体攻毒前后血清中特异性中和抗体的测定 | 第56-57页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体临床症状的观察及体温的测定 | 第57页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体白细胞数量的测定 | 第57页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体血清中特异性抗体的测定 | 第57页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体组织RT-PCR检测 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-75页 |
| ·重组表达载体的构建及酶切鉴定 | 第58-62页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第62页 |
| ·免疫荧光检测结果 | 第62-64页 |
| ·Western Blot检测结果 | 第64-66页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体的检测 | 第66-68页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖 | 第68-69页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌 | 第69-70页 |
| ·免疫猪体攻毒前后血清中特异性中和抗体的测定 | 第70-71页 |
| ·免疫猪体白细胞数量变化 | 第71-72页 |
| ·免疫猪体特异性抗猪瘟病毒E2或E~(rns)蛋白抗体水平 | 第72-73页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体临床症状观察及体温的测定 | 第73-75页 |
| ·免疫猪体攻毒后猪体血毒和鼻拭子载毒量的测定 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-79页 |
| 第四章 TRIF对抗猪瘟DNA疫苗免疫效果的增强作用研究 | 第79-99页 |
| ·材料和实验动物 | 第79-80页 |
| ·载体、病毒和细胞 | 第79页 |
| ·血清与二抗 | 第79-80页 |
| ·实验动物 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-83页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第80页 |
| ·TRIF重组质粒的鉴定 | 第80页 |
| ·动物分组及DNA免疫接种 | 第80-81页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的测定 | 第81页 |
| ·免疫小鼠IFN-γ水平的测定 | 第81页 |
| ·免疫猪体攻毒前后血清中特异性中和抗体的测定 | 第81页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体临床症状的观察及体温的测定 | 第81-82页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体白细胞数量的测定 | 第82页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体血清中特异性抗体的测定 | 第82页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体血清和鼻拭子样品的RT-PCR检测 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-94页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第83-85页 |
| ·免疫荧光检测结果 | 第85-86页 |
| ·pRK-TRIF对IFN-β和NF-κB启动子活性影响 | 第86-87页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体的检测 | 第87-89页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况 | 第89-90页 |
| ·免疫猪体特异性中和抗体的检测 | 第90页 |
| ·免疫猪体攻毒前后猪体临床症状的观察及体温的测定 | 第90-92页 |
| ·免疫猪体白细胞数量的检测 | 第92页 |
| ·免疫猪体特异性抗猪瘟病毒E2或E~(rns)蛋白抗体的检测 | 第92-93页 |
| ·免疫猪体攻毒后猪体血毒和鼻拭子载毒量的测定 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-99页 |
| 第五章 伪狂犬病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其初步应用 | 第99-108页 |
| ·材料 | 第101页 |
| ·病毒样品及增殖 | 第101页 |
| ·引物和探针序列 | 第101页 |
| ·方法 | 第101-102页 |
| ·病毒的培养 | 第101页 |
| ·病毒DNA提取 | 第101-102页 |
| ·临床标本的处理 | 第102页 |
| ·常规PCR(第一次PCR) | 第102页 |
| ·标准品的制备 | 第102页 |
| ·荧光定量PCR | 第102页 |
| ·结果 | 第102-106页 |
| ·标准曲线的建立 | 第102-104页 |
| ·特异性检测 | 第104页 |
| ·重复性检测 | 第104-105页 |
| ·细胞培养法和常规PCR法检测检测PRV | 第105-106页 |
| ·临床标本的检测 | 第106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| 研究总结 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-116页 |
| 硕博连读期间发表与待发表的文章 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
