引起肿瘤细胞自噬的小分子化合物的发现及其机制研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-31页 |
| 1 引言 | 第11-13页 |
| 2 自噬的研究进展 | 第13-29页 |
| ·自噬发生的分子机制 | 第13-14页 |
| ·自噬与细胞死亡的关系 | 第14-17页 |
| ·自噬与凋亡的关系 | 第17-19页 |
| ·自噬和坏死之间的关系 | 第19页 |
| ·自噬与神经退行性疾病 | 第19-22页 |
| ·自噬和肿瘤 | 第22-25页 |
| ·自噬与肿瘤的发生 | 第22页 |
| ·自噬与肿瘤治疗 | 第22-25页 |
| ·自噬的作用机制 | 第25-28页 |
| ·PI3K–AKT–mTOR 信号通路 | 第25-27页 |
| ·其它的信号通路 | 第27-28页 |
| ·自噬与肿瘤治疗 | 第28-29页 |
| 3 本课题的研究意义 | 第29-30页 |
| 4 本课题的研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 稳定表达EGFP-LC3 细胞株的建立 | 第31-41页 |
| 1 引言 | 第31页 |
| 2 实验材料 | 第31-33页 |
| ·细胞株及培养基 | 第31页 |
| ·化合物及其他试剂 | 第31-32页 |
| ·分子生物学材料 | 第32页 |
| ·主要耗材 | 第32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·分子生物学试验设备见表5 | 第33页 |
| 3 实验方法 | 第33-37页 |
| ·分子生物学常规方法 | 第33-34页 |
| ·细胞培养方法 | 第34页 |
| ·Western Blot 免疫印迹反应 | 第34-35页 |
| ·细胞转染 | 第35页 |
| ·单克隆细胞株的挑选 | 第35-37页 |
| 4 结果 | 第37-39页 |
| ·稳定细胞株的评价 | 第37-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 筛选化合物库里的抗肿瘤化合物 | 第41-51页 |
| 1 引言 | 第41页 |
| 2 材料 | 第41页 |
| ·细胞的培养 | 第41页 |
| ·仪器与材料 | 第41页 |
| ·化合物来源 | 第41页 |
| 3 方法 | 第41-43页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第41-42页 |
| ·内质网应激CHOP 激活荧光素酶检测 | 第42页 |
| ·蛋白酶体活性抑制的检测方法 | 第42-43页 |
| 4 结果 | 第43-49页 |
| ·初筛的结果 | 第43-46页 |
| ·复筛的结果 | 第46-49页 |
| 5 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 对诱导自噬的化合物的作用机制进行探讨 | 第51-66页 |
| 1 引言 | 第51-53页 |
| 2 实验材料 | 第53-54页 |
| ·抗体 | 第53页 |
| ·IKKβ检测 | 第53页 |
| ·化合物及其他试剂 | 第53-54页 |
| 3 实验方法 | 第54-57页 |
| ·免疫印迹 | 第54-56页 |
| ·IKKβ的抑制性检测 | 第56-57页 |
| ·MTT 法检测细胞存活率 | 第57页 |
| 4 实验结果 | 第57-65页 |
| ·抗肿瘤性质测定 | 第57页 |
| ·化合物引起细胞自噬的检测 | 第57-59页 |
| ·抑制剂对自噬的影响 | 第59页 |
| ·对自噬信号通路相关蛋白变化的检测 | 第59-61页 |
| ·ERK 抑制剂对自噬的影响 | 第61-62页 |
| ·化合物对IкB 的影响 | 第62-63页 |
| ·分子水平与IKKβ活性的抑制 | 第63-64页 |
| ·化合物引起了细胞的凋亡 | 第64-65页 |
| 5 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
