| 前言 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 常用缩略词表 | 第11-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一部分 绪论 | 第16-30页 |
| 1.Kazal型蛋白酶抑制剂的概况 | 第18-21页 |
| ·Kazal型蛋白酶抑制剂的结构特征 | 第18-19页 |
| ·Kazal型蛋白酶抑制剂的作用机理 | 第19-20页 |
| ·Kazal型蛋白酶抑制剂的抑制特性 | 第20-21页 |
| ·Kazal型蛋白酶抑制剂的功能 | 第21页 |
| 2.生殖相关的蛋白酶 | 第21-22页 |
| ·生殖概况 | 第21-22页 |
| ·生殖相关的蛋白酶研究 | 第22页 |
| 3.罗氏沼虾的生殖 | 第22-24页 |
| ·罗氏沼虾精卵受精过程 | 第23-24页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统Kazal型蛋白酶抑制剂与蛋白酶研究现状 | 第24页 |
| 展望 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-104页 |
| 第一章 日本沼虾及中华绒螯蟹雄性生殖相关的Kazal型蛋白酶抑制剂的分子克隆和表达特征分析 | 第32-52页 |
| 1.引言 | 第32-33页 |
| 2.材料 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| 3.方法 | 第34-43页 |
| ·日本沼虾和中华绒螯蟹雄性生殖系统总RNA的抽提 | 第34-35页 |
| ·日本沼虾和中华绒螯蟹雄性生殖系统cDNA的合成 | 第35页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI cDNA的分子克隆 | 第35-41页 |
| ·Northern blotting | 第41-43页 |
| 4.结果 | 第43-48页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI的基因克隆 | 第43-47页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI基因的组织表达特异性 | 第47-48页 |
| 5. 讨论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 第二章 日本沼虾及中华绒螯蟹雄性生殖系统相关的Kazal型蛋白酶抑制剂及其结构域的体外表达 | 第52-69页 |
| 1.引言 | 第52-53页 |
| 2.材料 | 第53-54页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| 3.方法 | 第54-61页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI成熟肽的体外表达 | 第54-58页 |
| ·Man-KPI三个结构域和Ers-KPI四个结构域的体外表达 | 第58-61页 |
| 4.结果 | 第61-65页 |
| ·pET-32a(+)/Man-KPI及pET-28a(+)/Ers-KPI的原核表达 | 第61-63页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI各结构域的原核表达 | 第63-65页 |
| 5.讨论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 第三章 Man-KPI及Ers-KPI的抑制特点和结构对功能的影响 | 第69-85页 |
| 1.引言 | 第69-70页 |
| 2.材料 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| 3. 方法 | 第70-73页 |
| ·表达产物的复性 | 第71页 |
| ·重组蛋白的浓度检测 | 第71页 |
| ·重组蛋白抑制活性分析 | 第71-72页 |
| ·rMan-KPI及rErs-KPI抑制机理的研究 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白和丝氨酸蛋白酶的相互作用 | 第73页 |
| ·明胶-SDS-PAGE | 第73页 |
| 4. 结果 | 第73-79页 |
| ·rMan-KPI及rErs-KPI的抑制活性 | 第73-74页 |
| ·rMan-KPI及rErs-KPI的抑制机理 | 第74-76页 |
| ·Man-KPI及Ers-KPI各结构域重组蛋白的抑制活性 | 第76-77页 |
| ·抑制剂-蛋白酶互作分析 | 第77-78页 |
| ·对罗氏沼虾精子粗提物的抑制活性 | 第78-79页 |
| 5. 讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 第四章 MSG蛋白的组织分布及功能研究 | 第85-102页 |
| 1. 引言 | 第85-86页 |
| 2. 材料 | 第86-87页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| 3. 方法 | 第87-93页 |
| ·罗氏沼虾取材 | 第87页 |
| ·Western blotting | 第87-88页 |
| ·免疫组化 | 第88-89页 |
| ·MSG在精子上的定位 | 第89-90页 |
| ·RNA干涉 | 第90-92页 |
| ·干扰效率检测 | 第92页 |
| ·明胶SDS-PAGE | 第92-93页 |
| ·明胶薄层分析(Gelatin substrate film assay) | 第93页 |
| ·受精和胚胎发育观测 | 第93页 |
| 4.结果 | 第93-97页 |
| ·MSG蛋白在雄性生殖系统中的分布和组织定位 | 第94页 |
| ·MSG在精子上的免疫荧光检测结果 | 第94-95页 |
| ·干涉效率检测 | 第95-96页 |
| ·RNA干涉对精子明胶水解活性的影响 | 第96页 |
| ·干涉后对受精和胚胎发育的影响 | 第96-97页 |
| 5.讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第五章 结论与展望 | 第102-104页 |
| 1.结论 | 第102页 |
| 2.有待进一步开展的工作 | 第102-104页 |
| 第三部分 本研究的创新点 | 第104-108页 |
| 第四部分 附录 | 第108-140页 |
| 附录一 硕士阶段部分工作 | 第110-132页 |
| 附录二 常用试剂配制一览表 | 第132-138页 |
| 附录三 作者简历 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
