| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| ·木质素概述 | 第11-13页 |
| ·木质素合成关键酶基因国内外研究现状 | 第13-17页 |
| ·苯丙酸途径上的调控涉及的酶类 | 第14-15页 |
| ·木质素单体特异合成相关的酶类的研究 | 第15-16页 |
| ·木质素特异合成途径下游酶类的调控研究 | 第16-17页 |
| ·竹木质素研究进展 | 第17-18页 |
| ·木质素单体合成相关酶的主要类型 | 第18-19页 |
| ·氧化还原酶类 | 第18-19页 |
| ·转移酶类 | 第19页 |
| ·裂合酶类 | 第19页 |
| ·合成酶类 | 第19页 |
| ·cDNA 的3’和5’的RACE 反应概述 | 第19-23页 |
| 2 引言 | 第23-27页 |
| ·研究背景 | 第23-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第24页 |
| ·研究内容、目标 | 第24-26页 |
| ·研究内容 | 第24页 |
| ·研究目标 | 第24-26页 |
| ·本研究采用的技术路线 | 第26-27页 |
| 3 材料和方法 | 第27-44页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·实验载体与菌株 | 第27页 |
| ·实验主要试剂 | 第27页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第27页 |
| ·实验引物设计 | 第27-28页 |
| ·孝顺竹 CAD 基因的克隆 | 第28-36页 |
| ·孝顺竹总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·孝顺竹总RNA 的检测 | 第29页 |
| ·孝顺竹cDNA 的合成 | 第29-30页 |
| ·PCR 反应及琼脂糖电泳 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增目的片段及产物回收 | 第31页 |
| ·目的片段与 T-载体的连接 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·重组子转化感受态细胞 | 第32页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第32-33页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第33页 |
| ·RACE(rapid amplification of cDNA ends)法末端片段扩增 | 第33-35页 |
| ·CAD 基因全长的拼接及生物信息学分析 | 第35-36页 |
| ·组织特异性表达分析 | 第36页 |
| ·CAD 基因过量表达载体构建 | 第36-38页 |
| ·CAD 基因过量表达载体的构建策略 | 第36-37页 |
| ·重组子的筛选及 PCR 验证 | 第37-38页 |
| ·过量表达载体转化农杆菌 | 第38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·过量表达载体转化农杆菌 | 第38页 |
| ·原核表达载体pE-SUMO-CAD 的构建 | 第38-42页 |
| ·原核表达载体pE-SUMO-CAD 构建方法 | 第38-40页 |
| ·重组子的筛选及酶切验证 | 第40-41页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第41页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第41页 |
| ·外源基因表达条件的优化 | 第41页 |
| ·外源基因所编码蛋白质的SDS-PAGE 分析 | 第41-42页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶的灌制 | 第41-42页 |
| ·染色和脱色 | 第42页 |
| ·孝顺竹4CL、COMT、 CCoAOMT 基因片段的克隆 | 第42-44页 |
| ·引物设计及PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·重组、克隆和DNA 序列分析 | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-59页 |
| ·实验PCR 引物 | 第44页 |
| ·孝顺竹材料RNA 提取 | 第44-45页 |
| ·CAD 基因片段的克隆 | 第45页 |
| ·5’-RACE 和3’-RACE 扩增与分析 | 第45-46页 |
| ·CAD 基因全长的拼接及生物信息学分析 | 第46-47页 |
| ·基因cDNA 编码区全长的拼接与分析 | 第46-47页 |
| ·氨基酸序列比较与系统进化树分析 | 第47页 |
| ·基因在植物不同组织中的表达量分析 | 第47-50页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第50页 |
| ·外源基因表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第50-54页 |
| ·外源基因表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第50-51页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第51-54页 |
| ·IPTG 的浓度 | 第51-52页 |
| ·低温诱导(25℃) | 第52-53页 |
| ·培养基的不同pH 值对诱导表达产物的影响 | 第53-54页 |
| ·4 CL、COMT、 CCoAOMT 基因片段的获得与分析 | 第54-59页 |
| ·扩增目的片段的引物 | 第54页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第54-55页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第55-59页 |
| 5 讨论与结论 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-75页 |
| 附录A 中英文缩写与注释 | 第68-69页 |
| 附录B CAD基因GenBank提交序列 | 第69-71页 |
| 附录C 4CL、COMT、CCoAOMT和CAD在NCBI中的BLAST截图 | 第71-73页 |
| 附录D 4CL、COMT、CCoAOMT和CAD的cDNA序列 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第76页 |
