| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 主要符号对照表 | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-19页 |
| ·选题意义 | 第9页 |
| ·国内外研究进展 | 第9-19页 |
| ·睾丸生精细胞凋亡相关基因研究 | 第9-11页 |
| ·SPATA4 基因的克隆 | 第11-16页 |
| ·SPATA4 基因的初步功能研究 | 第16-17页 |
| ·启动子的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·引物合成及序列测定 | 第19页 |
| ·细胞株、质粒及感受态细胞 | 第19页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第19页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第19-20页 |
| ·培养基的配制 | 第20页 |
| ·常用其他试剂及用品 | 第20页 |
| ·仪器设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·血液基因组DNA 提取 | 第22-23页 |
| ·酶切片段及PCR 反应产物的回收 | 第23-24页 |
| ·转化 | 第24-25页 |
| ·RNA 提取 | 第25页 |
| ·瞬时转染实验 | 第25页 |
| ·双荧光素酶报告基因活性检测 | 第25-26页 |
| ·统计学分析 | 第26-27页 |
| 第3章 Mouse-SPATA4 转录起始位点确认 | 第27-38页 |
| ·引言 | 第27-29页 |
| ·SMARTTM RACE cDNA Amplification 的原理 | 第27-29页 |
| ·研究内容 | 第29-33页 |
| ·RNA 提取及纯化 | 第29页 |
| ·First strand 合成 | 第29-30页 |
| ·Positive Control RACE Experiment | 第30-31页 |
| ·5'-RACE PCR Reaction | 第31-33页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第33页 |
| ·实验结果 | 第33-36页 |
| ·5'-RACE Ready cDNA 合成 | 第33-34页 |
| ·Positive Control | 第34-35页 |
| ·5'-RACE PCR 确定转录起始位点 | 第35-36页 |
| ·结论与讨论 | 第36-38页 |
| 第4章 Mouse-SPATA4 启动子转录活性分析 | 第38-48页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·研究内容 | 第38-43页 |
| ·SPATA4 基因启动子的克隆 | 第38-41页 |
| ·SPATA4 基因启动子5'侧翼截短片段报告载体构建 | 第41-42页 |
| ·转染及瞬时表达 | 第42页 |
| ·SPATA4 基因5'侧翼序列生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·SPATA4 基因启动子及其截短片段的克隆 | 第43页 |
| ·SPATA4 基因启动子5'侧翼截短片段活性分析 | 第43-44页 |
| ·SPATA4 基因5'侧翼序列生物信息学分析 | 第44-45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-48页 |
| ·转录因子结合位点缺失分析 | 第46-47页 |
| ·过表达转录因子RREB1、HSF1、ZF5 | 第47-48页 |
| 第5章 SPATA4 蛋白重组表达及纯化 | 第48-62页 |
| ·引言 | 第48-51页 |
| ·基因的重组与表达 | 第48-49页 |
| ·蛋白的分离纯化 | 第49-51页 |
| ·研究内容 | 第51-56页 |
| ·SPATA4 蛋白原核表达构建 | 第51-53页 |
| ·转化宿主蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第54-56页 |
| ·实验结果 | 第56-60页 |
| ·原核表达构建 | 第56页 |
| ·SPATA4 蛋白的表达 | 第56-57页 |
| ·SPATA4 蛋白的纯化 | 第57-60页 |
| ·结论与讨论 | 第60-62页 |
| ·亲和载体的选择 | 第60-61页 |
| ·Mal-SPATA4 蛋白切割 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第65页 |
