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HPPCn相互作用的膜蛋白筛选

缩略词表第1-7页
中文摘要第7-10页
Abstract第10-14页
前言第14-19页
第一部分.带His标签的HPPCn蛋白的表达纯化以及SMMC7721 细胞膜蛋白的分离第19-36页
 一、实验材料第19-23页
  1. 菌株及质粒载体第19-20页
  2. 细胞培养第20页
  3. 主要试剂第20页
  4. 主要仪器第20-21页
  5. 所需试剂的配制第21-23页
 二、实验方法第23-28页
  1. 表达带His标签的HPPCn工程菌的鉴定第23-25页
  2. 最佳诱导条件的确定第25页
  3. 摇瓶大量培养工程菌收集菌体及蛋白表达鉴定第25-26页
  4. 菌体超声破碎收集上清第26页
  5. 色谱纯化第26-27页
  6. SMMC7721 细胞膜蛋白的提取第27-28页
 三、实验结果第28-33页
  1. 工程菌BL21(DE3)-pET-24a (+)-His-HPPCn鉴定结果第28-29页
  2. 最佳诱导条件选择第29页
  3. 摇瓶培养蛋白表达鉴定第29-30页
  4. 超声破碎获取目的蛋白第30页
  5. 色谱纯化第30-33页
 四、讨论第33-36页
第二部分. His Pull-down寻找HPPCn相互作用膜蛋白第36-43页
 一、实验材料第36-37页
  1. 主要试剂第36页
  2. 主要仪器第36页
  3. 所需试剂的配置第36-37页
 二、实验方法第37-38页
  1. 置换缓冲体系第37页
  2. 带His标签的HPPCn与SMMC7721 细胞膜蛋白的交联第37页
  3. 交联复合体的纯化第37-38页
  4. 交联复合体的鉴定第38页
  5. 交联复合体质谱分析第38页
 三、实验结果第38-41页
  1. 缓冲体系的置换第38页
  2. 交联复合体的鉴定第38-40页
  3. 交联复合体切胶质谱鉴定第40-41页
 四、讨论第41-43页
第三部分. 角蛋白8/18 与HPPCn相互作用的验证第43-69页
 一、实验材料第43-45页
  1. 细胞培养第43页
  2. 菌株及质粒载体第43-44页
  3. 酶第44页
  4. 主要试剂第44-45页
  5. 引物设计第45页
 二、实验方法第45-57页
  1. 二步法细胞免疫组化确定角蛋白8/18 的细胞定位第45-46页
  2. PVDF膜蛋白结合实验第46-47页
  3. 免疫共沉淀验证角蛋白8/18 与HPPCn的相互作用第47-49页
  4. 角蛋白8/18 的真核表达载体pCDNA3.1-K8-IRES-K18 的构建第49-55页
  5. 质粒稳定转染细胞株的筛选第55-57页
  6. MTT法检测rhHPPCn对转染细胞增殖活性的影响第57页
 三、实验结果第57-65页
  1. 二步法免疫组化确定角蛋白8/18 的细胞定位第57-58页
  2. PVDF膜蛋白结合实验第58页
  3. 免疫共沉淀验证角蛋白8/18 与HPPCn的相互作用第58-60页
  4. 角蛋白8/18 的真核表达载体pCDNA3.1-K8-IRES-K18 的构建第60-63页
  5. 四个质粒稳定转染细胞株的筛选第63-64页
  6. MTT法检测rhHPPCn对转染细胞增殖活性的影响第64-65页
 四、讨论第65-69页
结论第69-70页
参考文献第70-72页
综述 角蛋白 8/18 与肝脏损伤及修复第72-81页
个人简历第81-82页
致谢第82页

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