| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-24页 |
| ·牛结核病概况 | 第10-13页 |
| ·病原 | 第10-11页 |
| ·牛结核病流行病学 | 第11-13页 |
| ·发病机制与免疫机理研究 | 第13-14页 |
| ·致病机理与发病机制 | 第13页 |
| ·机体抗牛分枝杆菌感染的免疫机理 | 第13-14页 |
| ·诊断技术的研究现状 | 第14-18页 |
| ·涂片抗酸染色法 | 第15页 |
| ·结核分枝杆菌的培养 | 第15页 |
| ·皮内变态反应检测 | 第15-16页 |
| ·病理学检测 | 第16页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第16页 |
| ·ELISA方法 | 第16-17页 |
| ·γ-干扰素试验 | 第17-18页 |
| ·分泌蛋白的研究进展 | 第18-22页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白的组成 | 第18-19页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白的生物学功能 | 第19页 |
| ·结核分枝杆菌几种分泌蛋白研究进展 | 第19-20页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白的研究方法 | 第20-22页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白在临床诊断中的应用 | 第22页 |
| ·研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 牛分枝杆菌ESAT-6和MPT83基因的克隆及鉴定 | 第24-35页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·标准菌株 | 第24页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·引物的设计合成 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-31页 |
| ·牛分枝杆菌的培养 | 第25页 |
| ·菌体的处理 | 第25-26页 |
| ·牛分支杆菌基因组DNA提取 | 第26页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第26-28页 |
| ·PCR扩增产物的电泳鉴定 | 第28页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第28页 |
| ·PCR产物与pET-22b(+)、pET-28a(+)载体的酶切 | 第28-29页 |
| ·目的基因与pTE载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第30-31页 |
| ·重组质粒酶切鉴定及测序 | 第31页 |
| ·原核表达载体的构建和鉴定 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-34页 |
| ·ESAT-6和MPT83基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·原核表达重组质粒的构建和酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·原核表达载体目的基因的测序鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·限制性内切酶的应用 | 第34-35页 |
| 第三章 牛分枝杆菌ESAT-6和MPT83蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·重组载体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·目标蛋白的小量诱导表达 | 第36页 |
| ·目标蛋白的定位 | 第36页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯胺凝胶电泳 | 第36-37页 |
| ·目标蛋白的大量表达 | 第37页 |
| ·目标蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化蛋白的复性和回收 | 第38页 |
| ·Western-blot检测重组蛋白的抗原性 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·重组质粒诱导表达结果 | 第39-41页 |
| ·Western-blot检测重组蛋白的抗原性 | 第41页 |
| ·重组质粒纯化结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·原核表达系统 | 第42页 |
| ·包涵体的变性、复性 | 第42-44页 |
| 第四章 重组蛋白在ELISA检测方法中的初步应用研究 | 第44-52页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·牛型结核菌素PPD及抗原 | 第44页 |
| ·血清 | 第44页 |
| ·ELISA主要试剂 | 第44-45页 |
| ·其它试剂及设备 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-47页 |
| ·ESAT-6重组蛋白最佳抗原包被量和血清稀释度的确定 | 第45-46页 |
| ·MPT83重组蛋白最佳抗原包被量和血清稀释度的确定 | 第46页 |
| ·重组蛋白间接ELISA反应条件的确定 | 第46页 |
| ·重组蛋白间接ELISA判定标准的确定 | 第46页 |
| ·重组蛋白ELISA检测方法的特异性和敏感性试验 | 第46页 |
| ·交叉反应试验 | 第46页 |
| ·重复性试验 | 第46-47页 |
| ·对比试验 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·间接ELISA最佳抗原包被量和血清稀释度的确定 | 第47-48页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度 | 第48页 |
| ·底物显色液最佳作用时间确定 | 第48-49页 |
| ·间接ELISA判定标准确定 | 第49页 |
| ·间接ELISA检测方法的特异性和敏感性试验 | 第49页 |
| ·交叉反应试验 | 第49-50页 |
| ·重复性试验 | 第50页 |
| ·对比试验(临床检测样本结果) | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
