| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 蛋白质构象病和朊病毒疾病概述 | 第13-43页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 1. 蛋白质构象病简述 | 第14-17页 |
| ·蛋白质构象病的类型 | 第15-16页 |
| ·蛋白质构象病的致病因素 | 第16-17页 |
| 2 朊病毒疾病概述 | 第17-24页 |
| ·阮病毒疾病的研究简史 | 第17-20页 |
| ·朊病毒疾病的类型 | 第20-24页 |
| 3 "唯蛋白"假说和朊病毒感染因子 | 第24-28页 |
| ·"唯蛋白"假说的主要内容 | 第25页 |
| ·羊瘙痒症感染因子的纯化和PrP~(Sc)的发现 | 第25-26页 |
| ·PrP~C蛋白的发现和PRNP基因的克隆 | 第26页 |
| ·PrP~(Sc)是朊病毒疾病的感染因子 | 第26-27页 |
| ·"唯蛋白"假说的相关争论 | 第27-28页 |
| 4 朊蛋白的分子结构 | 第28-31页 |
| ·朊蛋白分子的一级结构 | 第28-30页 |
| ·朊蛋白分子的高级结构 | 第30-31页 |
| 5 PrP~c蛋白的生理功能 | 第31-33页 |
| ·参与神经系统维持 | 第31-32页 |
| ·抗叠肽神经毒性作用 | 第32页 |
| ·具有抗氧化作用 | 第32-33页 |
| ·参与细胞信号转导 | 第33页 |
| ·参与细胞内吞作用 | 第33页 |
| 6 朊病毒疾病的分子致病机制 | 第33-37页 |
| ·朊蛋白的构象转变的分子机制 | 第34-35页 |
| ·朊蛋白的聚集特征研究 | 第35-36页 |
| ·PrP~(Sc)蛋白的复制和增殖研究 | 第36-37页 |
| 7 朊病毒疾病的诊断和治疗 | 第37-41页 |
| ·朊病毒疾病的临床和组织病理学诊断 | 第37-38页 |
| ·生物学诊断方法 | 第38-39页 |
| ·基因诊断方法 | 第39页 |
| ·免疫学诊断方法 | 第39-40页 |
| ·朊病毒疾病的治疗和预防 | 第40-41页 |
| 8 现存问题和展望 | 第41-43页 |
| 第二章 利用酵母双杂交系统筛选朊蛋白的互作蛋白 | 第43-58页 |
| 前言 | 第43-44页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第44-46页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·实验材料和试剂 | 第44-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-53页 |
| ·质粒转化到大肠杆菌的一般方法 | 第46-47页 |
| ·质粒小量提取方法 | 第47页 |
| ·酵母双杂交系统简介 | 第47-48页 |
| ·牛脑pGADT7—cDNA文库的扩增 | 第48-49页 |
| ·pGBKT7-PrP小规模转化酵母菌 | 第49-50页 |
| ·pGBKT7-PrP的自激活检测 | 第50-51页 |
| ·pGADT7—cDNA文库质粒转化至已携带钓饵质粒的酵母 | 第51-52页 |
| ·转化子的筛选 | 第52页 |
| ·阳性克隆质粒的提取 | 第52-53页 |
| ·回交实验和阳性筛选子的插入片段的序列分析 | 第53页 |
| 3 实验结果与分析 | 第53-56页 |
| ·pGBDKT7—PrP无自激活特性 | 第53-54页 |
| ·文库初筛结果 | 第54页 |
| ·阳性克隆的重复鉴定和分析 | 第54-55页 |
| ·KCTD1序列和蛋白结构特点 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 牛PrP蛋白与KCTD蛋白细胞内共定位和互作结构域定位 | 第58-70页 |
| 前言 | 第58-59页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第59-61页 |
| ·实验仪器 | 第59页 |
| ·实验材料和试剂 | 第59-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-65页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第61页 |
| ·共定位实验所需质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·细胞的复苏、培养和冻存 | 第62-63页 |
| ·质粒的脂质体法转染 | 第63-64页 |
| ·截短突变PrP序列构建到pGBDKT7载体 | 第64-65页 |
| ·酵母双杂交筛选与KCTD1互作的截短突变PrP | 第65页 |
| 3 实验结果与分析 | 第65-69页 |
| ·KCTD1蛋白与PrP蛋白在细胞内共定位 | 第65-66页 |
| ·酵母双杂交筛选结果 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 第四章 人野生型或突变型PrP蛋白与KCTD1蛋白结合动力学分析 | 第70-90页 |
| 前言 | 第70-71页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第71-73页 |
| ·实验仪器 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-73页 |
| 2 实验方法 | 第73-80页 |
| ·质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·KCTD1蛋白的原核表达与纯化 | 第74-75页 |
| ·PrP蛋白的原核表达与纯化 | 第75-77页 |
| ·蛋白定量方法 | 第77页 |
| ·圆二色谱(CD)仪检查PrP蛋白复性情况 | 第77-78页 |
| ·SPR分析KCTD1蛋白与PrP蛋白结合动力学特征 | 第78-80页 |
| 3 实验结果与分析 | 第80-88页 |
| ·KCTD1蛋白的纯化结果 | 第80-81页 |
| ·PrP蛋白的纯化和复性结果 | 第81-83页 |
| ·蛋白定量结果 | 第83-84页 |
| ·KCTD1和PrP~(wt)蛋白结合动力学特征 | 第84-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-100页 |
| 博士期间发表的论文 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
