| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-29页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第15-16页 |
| 1.2 PRRS的病原学 | 第16-22页 |
| 1.2.1 PRRSV的分类及理化特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 PRRSV的基因组成及特性 | 第17页 |
| 1.2.3 PRRSV基因组的翻译和复制 | 第17-18页 |
| 1.2.4 PRRSV蛋白结构与功能 | 第18-22页 |
| 1.3 宿主蛋白与PRRSV蛋白相互作用的研究 | 第22-23页 |
| 1.4 干扰素刺激基因(ISG)及其研究方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 干扰素刺激基因(ISG) | 第23-24页 |
| 1.4.2 ISG筛选方法 | 第24-25页 |
| 1.4.3 抗病毒ISG鉴定方法 | 第25页 |
| 1.5 抗病毒ISGs的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.5.1 胆固醇25 羟化酶(CH25H)和25 羟基胆固醇(25HC) | 第25-26页 |
| 1.5.2 2 ’,5’寡腺苷酸合成酶(OAS) | 第26页 |
| 1.5.3 ISG15 | 第26-27页 |
| 1.5.4 MOV10 研究进展 | 第27页 |
| 1.5.5 TRIM25 研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5.6 cGAS研究进展 | 第28页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 抗PRRSV ISGs的筛选与鉴定 | 第29-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 病毒与细胞 | 第29页 |
| 2.1.2 质粒、菌种及主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 猪源ISGs基因的获取 | 第30-32页 |
| 2.2.2 真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3 初步筛选抗PRRSV的 ISGs | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-35页 |
| 2.3.1 带有ISGs真核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 抗PRRSV ISGs的筛选 | 第35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 MOV10 抑制PRRSV复制机制的研究 | 第37-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 病毒与细胞 | 第37页 |
| 3.1.2 质粒与菌种 | 第37页 |
| 3.1.3 抗体与试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.4 主要设备仪器 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 3.2.1 稳定表达猪源MOV10 MARC-145 细胞系的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 制备含有MOV10 基因的慢病毒颗粒 | 第39-40页 |
| 3.2.3 表达MOV10 基因的MARC-145 细胞系的制备 | 第40页 |
| 3.2.4 稳定表达MOV10 MARC-145 细胞系的鉴定 | 第40页 |
| 3.2.5 MOV10 抑制PRRSV复制的研究 | 第40-41页 |
| 3.2.6 MOV10 对病毒吸附和进入的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.7 MOV10与N蛋白互作的研究 | 第42-43页 |
| 3.2.8 激光共聚焦实验 | 第43-44页 |
| 3.2.9 MOV10 影响N蛋白在细胞中的定位 | 第44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-50页 |
| 3.3.1 pLO-CMV-MOV10 的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 MARC-145-MOV10 的筛选鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.3 MOV10 抑制PRRSV复制 | 第46页 |
| 3.3.4 MOV10 不影响PRRSV对细胞的吸附和进入 | 第46-47页 |
| 3.3.5 体外真核表达N蛋白与MOV10 相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3.6 PRRSV N蛋白与宿主MOV10 相互作用 | 第48页 |
| 3.3.7 MOV10与N蛋白共定位于细胞质 | 第48-49页 |
| 3.3.8 MOV10 影响N蛋白的细胞定位 | 第49页 |
| 3.3.9 MARC-145-MOV10对PRRSV N蛋白细胞定位的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 TRIM25 抑制PRRSV复制及PRRSV拮抗TRIM25 抗病毒作用机制的研究 | 第52-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 病毒与细胞 | 第52页 |
| 4.1.2 质粒与菌种 | 第52页 |
| 4.1.3 抗体与试剂 | 第52页 |
| 4.1.4 主要设备仪器 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 TRIM25 及RIG-I真核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 过表达TRIM25 对PRRSV复制的影响 | 第54页 |
| 4.2.3 干扰TRIM25 对PRRSV复制的影响 | 第54-55页 |
| 4.2.4 PRRSV感染对TRIM25 表达的影响 | 第55页 |
| 4.2.5 N蛋白积累对TRIM25 表达的影响 | 第55页 |
| 4.2.6 TRIM25 与N蛋白互作验证 | 第55-56页 |
| 4.2.7 TRIM25 与RIG-I互作验证 | 第56页 |
| 4.2.8 N蛋白对TRIM25 与RIG-I互作的影响 | 第56页 |
| 4.2.9 TRIM25 以及N蛋白对RIG-I泛素化的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.10 双荧光素酶报告实验 | 第57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-63页 |
| 4.3.1 过表达TRIM25 抑制PRRSV复制 | 第57-58页 |
| 4.3.2 沉默TRIM25 促进PRRSV复制 | 第58页 |
| 4.3.3 PRRSV感染与N蛋白积累抑制TRIM25 表达 | 第58-59页 |
| 4.3.4 TRIM25 与N蛋白互作 | 第59-60页 |
| 4.3.5 TRIM25 与RIG-I互作 | 第60页 |
| 4.3.6 N蛋白影响TRIM25 与RIG-I互作 | 第60-61页 |
| 4.3.7 N蛋白抑制RIG-I泛素化 | 第61-62页 |
| 4.3.8 N蛋白抑制IFN-β 启动子活性 | 第62页 |
| 4.3.9 TRIM25 拮抗N蛋白对RIG-I信号通路的抑制 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 cGAS抑制PRRSV复制机制的研究 | 第65-82页 |
| 5.1 实验材料 | 第65页 |
| 5.1.1 病毒与细胞 | 第65页 |
| 5.1.2 抗体与试剂 | 第65页 |
| 5.1.3 主要设备仪器 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-73页 |
| 5.2.1 p3XFLAG-cGAS载体的构建 | 第65-66页 |
| 5.2.2 过表达p3XFLAG-cGAS对PRRSV复制的影响 | 第66页 |
| 5.2.3 过表达cGAS对IFN-β 产生的影响 | 第66-67页 |
| 5.2.5 cGAS对ISGs产生的影响 | 第67页 |
| 5.2.6 缺失cGAS基因MARC-145 细胞系的构建 | 第67-70页 |
| 5.2.7 缺失cGAS对PRRSV复制的影响 | 第70页 |
| 5.2.8 缺失cGAS对IFN-β 以及ISGs产生的影响 | 第70页 |
| 5.2.9 线粒体损伤鉴定 | 第70页 |
| 5.2.10 cGAMP对PRRSV复制的影响 | 第70-71页 |
| 5.2.11 cGAMP活性的检测 | 第71页 |
| 5.2.12 细胞质线粒体DNA的检测 | 第71-72页 |
| 5.2.13 cGAS与ds DNA共定位 | 第72页 |
| 5.2.14 过表达cGAS对不同PRRSV株复制的影响 | 第72-73页 |
| 5.3 实验结果 | 第73-80页 |
| 5.3.0 过表达cGAS抑制PRRSV复制 | 第73页 |
| 5.3.1 过表达cGAS促进IFN-β 以及ISGs的表达 | 第73-74页 |
| 5.3.2 缺失cGAS促进PRRSV复制 | 第74-75页 |
| 5.3.3 缺失cGAS不影响IFN-β 以及ISGs | 第75页 |
| 5.3.4 cGAMP抑制PRRSV复制 | 第75-76页 |
| 5.3.5 cGAMP活性 | 第76页 |
| 5.3.6 PRRSV感染损伤线粒体 | 第76-77页 |
| 5.3.7 PRRSV感染促进线粒体DNA释放到细胞质 | 第77-79页 |
| 5.3.8 cGAS与线粒体DNA共定位 | 第79页 |
| 5.3.9 cGAS抑制不同基因型的PRRSV复制 | 第79-80页 |
| 5.4 讨论 | 第80-82页 |
| 第六章 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95-96页 |
