| 摘要 | 第11-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| 1.1 圆环病毒的概述 | 第14页 |
| 1.2 圆环病毒的致病机制 | 第14页 |
| 1.3 水貂圆环病毒 | 第14-15页 |
| 1.3.1 水貂圆环病毒的发现 | 第14-15页 |
| 1.3.2 水貂圆环病毒基因组结构 | 第15页 |
| 1.3.3 水貂圆环病流行情况 | 第15页 |
| 1.3.4 水貂圆环病诊断技术 | 第15页 |
| 1.3.5 研究展望 | 第15页 |
| 1.4 实时定量PCR技术优点及应用 | 第15-16页 |
| 1.5 间接ELISA技术优点及应用 | 第16页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 载体 | 第17页 |
| 2.1.2 主要酶类及试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要溶剂的配制 | 第17-18页 |
| 2.1.4 试验仪器和设备 | 第18页 |
| 2.1.5 病毒、血清、病料 | 第18页 |
| 2.2 实时定量PCR检测方法的建立及应用 | 第18-22页 |
| 2.2.1 基因扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 重组质粒DNA标准品的制备 | 第21页 |
| 2.2.4 实时定量PCR反应条件优化 | 第21页 |
| 2.2.5 标准曲线建立 | 第21-22页 |
| 2.2.6 特异性试验 | 第22页 |
| 2.2.7 重复性试验 | 第22页 |
| 2.2.8 临床样品的检测与验证 | 第22页 |
| 2.3 人工感染试验 | 第22-23页 |
| 2.3.1 病毒的制备 | 第22页 |
| 2.3.2 实验动物 | 第22-23页 |
| 2.3.3 MiCV人工感染水貂及样品采集 | 第23页 |
| 2.3.4 样品处理 | 第23页 |
| 2.3.5 检测MiCV感染水貂后病毒分布情况 | 第23页 |
| 2.4 水貂圆环病毒全基因组序列分析 | 第23-25页 |
| 2.4.1 病毒DNA模板的制备 | 第23页 |
| 2.4.2 MiCV全基因组引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.4.3 MiCV全基因组的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.4.4 扩增产物的回收 | 第24页 |
| 2.4.5 目的片段与pMD-T载体的连接和转化 | 第24页 |
| 2.4.6 基因组分析 | 第24-25页 |
| 2.5 间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第25-30页 |
| 2.5.1 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 2.5.2 重组蛋白的包涵体表达分析及纯化 | 第25-27页 |
| 2.5.3 间接ELISA条件优化 | 第27-28页 |
| 2.5.4 判定标准的测定 | 第28页 |
| 2.5.5 特异性试验 | 第28页 |
| 2.5.6 批内及批间重复性试验 | 第28-29页 |
| 2.5.7 间接ELISA方法与Western Blot方法比较 | 第29页 |
| 2.5.8 临床样品的检测与验证 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-51页 |
| 3.1 实时定量PCR检测方法的建立及应用 | 第30-33页 |
| 3.1.1 Cap基因PCR扩增结果 | 第30页 |
| 3.1.2 pMDT-cap重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.1.3 标准品 | 第31页 |
| 3.1.4 实时定量PCR最佳反应条件 | 第31页 |
| 3.1.5 标准曲线建立 | 第31-32页 |
| 3.1.6 特异性试验 | 第32页 |
| 3.1.7 重复性试验 | 第32-33页 |
| 3.1.8 临床样品的检测结果 | 第33页 |
| 3.2 人工感染试验 | 第33-35页 |
| 3.2.1 MiCV人工感染水貂疾病模型临床症状 | 第33-34页 |
| 3.2.2 检测MiCV感染水貂后病毒分布情况 | 第34-35页 |
| 3.2.3 MiCV在感染水貂中不同组织感染率 | 第35页 |
| 3.3 水貂圆环病毒全基因组序列分析 | 第35-41页 |
| 3.3.1 MiCV全基因组扩增结果 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| 3.3.3 序列测定结果 | 第36-37页 |
| 3.3.4 MiCV同源性、遗传变异及进化分析 | 第37-41页 |
| 3.4 间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第41-51页 |
| 3.4.1 重组质粒的鉴定和表达 | 第41-43页 |
| 3.4.2 重组蛋白的包涵体表达分析及纯化 | 第43-44页 |
| 3.4.3 重组蛋白纯化后Western Blot鉴定 | 第44页 |
| 3.4.4 间接ELISA最佳反应条件 | 第44-47页 |
| 3.4.5 判定标准的确定 | 第47页 |
| 3.4.6 批内及批间重复性试验 | 第47-48页 |
| 3.4.7 特异性试验 | 第48页 |
| 3.4.8 间接ELISA方法与WesternBlot方法比较 | 第48-49页 |
| 3.4.9 临床样品的检测结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 实时定量PCR检测方法的建立及检测 | 第51页 |
| 4.2 间接ELISA检测方法的建立及检测 | 第51-52页 |
| 4.3 建立的实时定量PCR方法与间接ELISA方法比较 | 第52-53页 |
| 4.4 水貂圆环病毒全基因组序列分析 | 第53页 |
| 4.5 MiCV在感染水貂组织中分布情况 | 第53-54页 |
| 4.6 MiCV在不同省份流行分布情况 | 第54页 |
| 4.7 根据目前研究对于MiCV的评估 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
