| 英文缩略词对照表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 一、前言 | 第12-16页 |
| 二、实验材料 | 第16-20页 |
| 1. 细胞和培养基 | 第16页 |
| 2. 主要实验相关抗体 | 第16-17页 |
| 3. 其他主要生物学试剂 | 第17-18页 |
| 4. 试剂配置 | 第18-19页 |
| 5. 试剂盒 | 第19页 |
| 6. 质粒 | 第19页 |
| 7. 实验动物 | 第19-20页 |
| 三、仪器设备 | 第20-21页 |
| 四、实验方法 | 第21-39页 |
| 1. 细胞冻存 | 第21页 |
| 2. 细胞的复苏 | 第21页 |
| 3. 细胞传代 | 第21-22页 |
| 4. 细胞计数 | 第22页 |
| 5. 细菌的常规操作 | 第22-23页 |
| 6. 质粒构建 | 第23-27页 |
| 7. 感受态细菌的转化 | 第27页 |
| 8. 菌落单克隆鉴定 | 第27-28页 |
| 9. 质粒提取 | 第28-30页 |
| 10. 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 11. 质粒测序 | 第30页 |
| 12. 质粒转染 | 第30页 |
| 13. pLenti-cas9慢病毒包装 | 第30-31页 |
| 14. 感染H1299细胞 | 第31页 |
| 15. H299 pLenti-cas9稳转细胞株(cell pool)筛选 | 第31页 |
| 16. pLenti-CPT1A-gRNA慢病毒包装 | 第31页 |
| 17. 感染H1299 pLenti-cas9稳定细胞混合克隆 | 第31-32页 |
| 18. H1299 CPT1A基因编辑稳定细胞混合克隆筛选 | 第32页 |
| 19. CCK8实验 | 第32-33页 |
| 20. 细胞迁移实验 | 第33页 |
| 21. 流式细胞术 | 第33页 |
| 22. 细胞总蛋白提取 | 第33-34页 |
| 23. 免疫印迹(WesternBlot) | 第34-36页 |
| 24. 小鼠荷瘤实验 | 第36-37页 |
| 25. 苏木素伊红染色 | 第37-38页 |
| 26. 统计学方法及分析软件 | 第38-39页 |
| 五、实验结果 | 第39-63页 |
| 第一部分: Etomoxir增强顺铂对肺癌细胞系A549的抑制作用 | 第39-49页 |
| 1. Etomoxir与Cisplatin的药物工作浓度测定 | 第39-40页 |
| 2. Etomoxir与Cisplatin药物联用明显抑制肿瘤细胞增殖 | 第40-41页 |
| 3. Etomoxir与Cisplatin药物联用促进肿瘤细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 4. Etomoxir与Cisplatin药物联用抑制肿瘤细胞的迁移能力 | 第42-44页 |
| 5. Etomoxir与Cisplatin药物联用抑制肿瘤细胞的干性基因表达 | 第44-45页 |
| 6. Cisplatin联合Etomoxir对小鼠肺癌的治疗效果 | 第45-49页 |
| 第二部分: 通过PX335载体质粒系统建立敲除CPT1A基因的H1299细胞系 | 第49-56页 |
| 7.非小细胞肺癌细胞H1299的CPT1A基因靶位点设计 | 第49-50页 |
| 8. PX335质粒信息及插入片段 | 第50页 |
| 9. sgRNA oligo合成及PX335质粒线性化 | 第50-52页 |
| 10. PX335-sgRNA质粒测序结果及Surveyor分析 | 第52-54页 |
| 11. 构建敲除CPT1A的293FT突变细胞系 | 第54页 |
| 12. 构建敲除CPT1A的H1299突变细胞系 | 第54-56页 |
| 第三部分: 通过pLenti-Guide-puro载体质粒及pLenti-cas9质粒系统建立敲除CPT1A基因的H1299细胞系 | 第56-63页 |
| 13.非小细胞肺癌细胞H1299的CPT1A基因靶位点设计 | 第56-57页 |
| 14. pLenti-Guide-puro质粒质粒信息及插入片段 | 第57页 |
| 15. sgRNA oligo合成及pLenti-Guide-puro质粒线性化 | 第57-58页 |
| 16. pLenti-CPT1A-gRNA质粒测序结果 | 第58-61页 |
| 17. H1299非小细胞肺癌细胞系CPT1A基因编辑核酸水平效果检测 | 第61-62页 |
| 18. H1299非小细胞肺癌细胞系CPT1A基因编辑蛋白水平效果检测 | 第62-63页 |
| 六、讨论 | 第63-67页 |
| 1. 脂肪酸代谢与肿瘤的关系 | 第63-64页 |
| 2. 肿瘤干细胞与治疗抵抗的关系 | 第64-65页 |
| 3. CRISPR/Cas9技术在基因功能研究和肿瘤治疗中的应用 | 第65-67页 |
| 七、参考文献 | 第67-71页 |
| 八、全文总结 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
