| 内容提要 | 第1-15页 |
| 主要英文缩写词表 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-50页 |
| 1 人乳头瘤病毒感染与子宫颈癌的发生 | 第19-28页 |
| ·HPV 病原体 | 第19-22页 |
| ·病毒结构 | 第19-20页 |
| ·基因组结构 | 第20页 |
| ·病毒基因的表达调控 | 第20页 |
| ·病毒蛋白的功能 | 第20-21页 |
| ·病毒的生命周期 | 第21-22页 |
| ·HPV 的分类 | 第22-23页 |
| ·HPV 的基因型 | 第22页 |
| ·HPV 的分组 | 第22页 |
| ·HPV 的致癌危险性 | 第22-23页 |
| ·HPV 的致癌机制 | 第23-28页 |
| ·HPV 致癌的病毒性因素 | 第24-26页 |
| ·形成恶性肿瘤的宿主因素 | 第26-27页 |
| ·宿主对HPV 感染的反应 | 第27-28页 |
| 2 预防性HPV 疫苗 | 第28-33页 |
| ·预防性HPV 疫苗的临床前研究 | 第28-29页 |
| ·预防性HPV 疫苗的临床试验 | 第29-30页 |
| ·预防性HPV 疫苗存在的问题 | 第30-32页 |
| ·科学问题 | 第30-31页 |
| ·接种人群 | 第31页 |
| ·实施问题 | 第31-32页 |
| ·第二代疫苗 | 第32-33页 |
| 3 治疗性HPV 疫苗 | 第33-41页 |
| ·治疗性HPV 疫苗概述 | 第33-34页 |
| ·治疗性HPV 疫苗类型 | 第34-39页 |
| ·活载体疫苗 | 第35-36页 |
| ·肽/蛋白疫苗 | 第36-37页 |
| ·核酸疫苗 | 第37-38页 |
| ·细胞疫苗 | 第38页 |
| ·联合疫苗 | 第38-39页 |
| ·治疗性HPV 疫苗的动物模型 | 第39页 |
| ·治疗性HPV 疫苗的临床试验 | 第39-40页 |
| ·治疗性HPV 疫苗的型特异性及安全性 | 第40-41页 |
| ·治疗性HPV 疫苗未取得更大成功 | 第41页 |
| 4 以减毒沙门氏菌为载体接种疫苗和治疗肿瘤 | 第41-50页 |
| ·沙门氏菌感染引起的免疫应答 | 第42-43页 |
| ·减毒沙门氏菌作为活载体的使用 | 第43-45页 |
| ·减毒沙门氏菌运输异源抗原 | 第44页 |
| ·减毒沙门氏菌运输质粒DNA | 第44-45页 |
| ·口服减毒沙门氏菌DNA 疫苗诱导免疫反应的机制 | 第45页 |
| ·减毒沙门氏菌用于肿瘤治疗 | 第45-46页 |
| ·减毒沙门氏菌携带肿瘤治疗性疫苗 | 第45-46页 |
| ·减毒沙门氏菌用于肿瘤治疗 | 第46页 |
| ·减毒沙门氏菌运载系统的改良 | 第46-50页 |
| ·细菌载体的致弱 | 第46-47页 |
| ·重组表型的稳定性 | 第47页 |
| ·靶向抗原传递 | 第47-48页 |
| ·细菌载体的溶解 | 第48页 |
| ·多价减毒沙门氏菌疫苗 | 第48页 |
| ·调控元件 | 第48-50页 |
| ·启动子的选择 | 第48页 |
| ·远程调控细菌载体 | 第48-50页 |
| 第二章 材料与方法 | 第50-73页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·质粒、菌株 | 第51页 |
| ·抗体及ELISA 检测试剂盒 | 第51页 |
| ·细胞和实验动物 | 第51页 |
| ·组织来源 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-72页 |
| ·构建原核表达质粒PET28A-HPV16-L1 | 第52-55页 |
| ·提取子宫颈癌基因组DNA | 第52页 |
| ·扩增并回收HPV16-L1 基因 | 第52-53页 |
| ·HPV16-L1 基因与PMD18-T 连接 | 第53页 |
| ·制备JM109 感受态细菌 | 第53页 |
| ·连接产物转化感受态JM109 | 第53页 |
| ·挑菌培养并提取PMD18-T-HPV16-L1 质粒 | 第53-54页 |
| ·酶切鉴定PMD18-T-HPV16-L1 | 第54页 |
| ·测序鉴定PMD18-T-HPV16-L1 | 第54页 |
| ·构建原核表达质粒PET28A-HPV16-L1 | 第54页 |
| ·酶切鉴定PET28A-HPV16-L1 | 第54-55页 |
| ·原核表达HPV16-L1 蛋白并检测其免疫原性 | 第55-58页 |
| ·PET28A-HPV16-L1 转化入大肠杆菌BL21(DE3) | 第55页 |
| ·PCR 鉴定重组表达菌BL21(PET28A-HPV16-L1) | 第55页 |
| ·IPTG 诱导表达HPV16-L1 蛋白 | 第55页 |
| ·SDS PAGE 检测菌体中HPV16-L1 蛋白 | 第55页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析菌体中HPV16-L1 蛋白 | 第55-56页 |
| ·纯化菌体中HPV16-L1 蛋白 | 第56-57页 |
| ·ELISA 检测纯化的HPV16-L1 蛋白 | 第57页 |
| ·电镜观察HPV16-L1 VLP 形态 | 第57页 |
| ·纯化的HPV16-L1 蛋白免疫小鼠 | 第57-58页 |
| ·ELISA 检测血清中抗体 | 第58页 |
| ·构建真核表达质粒PCDNA3.1-HPV16-L1 | 第58-60页 |
| ·扩增HPV16-L1 目的片段 | 第58页 |
| ·构建并鉴定PMD18-T-HPV16-L1 质粒 | 第58页 |
| ·构建并鉴定PCDNA3.1-HPV16-L1 质粒 | 第58-59页 |
| ·PCDNA3.1-HPV16-L1 转染BHK 细胞 | 第59页 |
| ·提取BHK 细胞蛋白 | 第59-60页 |
| ·鉴定BHK 细胞中HPV16-L1 蛋白 | 第60页 |
| ·检测减毒沙门氏菌携带PCDNA3.1-HPV16-L1 的免疫原性 | 第60-62页 |
| ·制备电转化感受态减毒沙门氏菌 | 第60-61页 |
| ·PCDNA3.1-HPV16-L1 电转化减毒沙门氏菌 | 第61页 |
| ·菌液PCR 鉴定重组减毒沙门氏菌 | 第61页 |
| ·重组减毒沙门氏菌免疫小鼠 | 第61页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清和阴道冲洗液抗HPV1-L6 抗体 | 第61页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清中IL-2 和IFN-Γ | 第61-62页 |
| ·构建PGC-SIRNA-E6/E7 重组质粒 | 第62-65页 |
| ·设计三对SIRNA 寡核苷酸序列 | 第62-63页 |
| ·线性化并回收PGC-SILENCER 载体 | 第63页 |
| ·连接PGC-SILENCER 载体与SIRNA 模板链 | 第63页 |
| ·鉴定PGC-SIRNA 重组质粒 | 第63-64页 |
| ·PGC-SIRNA 转染SIHA 细胞 | 第64页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察并计算转染效率 | 第64页 |
| ·半定量RT-PCR 检测SIHA 细胞中HPV-E6/E7 MRNA | 第64-65页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析SIHA 细胞中HPV-E6/E7 蛋白 | 第65页 |
| ·免疫荧光检测SIHA 细胞中HPV-E6/E7 蛋白 | 第65页 |
| ·PGC-SIRNA-E6/E7 对SIHA 细胞的抑制作用 | 第65-67页 |
| ·MTT 检测SIHA 细胞的生长情况 | 第65-66页 |
| ·流式细胞术检测SIHA 细胞的凋亡 | 第66页 |
| ·TUNEL 检测SIHA 细胞的凋亡 | 第66页 |
| ·HE 染色观察SIHA 细胞形态 | 第66-67页 |
| ·电镜观察SIHA 细胞超微结构 | 第67页 |
| ·RT-PCR 检测SIHA 细胞中凋亡相关基因MRNA | 第67页 |
| ·WESTEN BLOTTING 检测SIHA 细胞中凋亡相关蛋白 | 第67页 |
| ·免疫细胞化学染色检测SIHA 细胞中凋亡相关蛋白 | 第67页 |
| ·PGC-SIRNA-E6 对人子宫颈癌皮下移植瘤的作用 | 第67-69页 |
| ·建立裸鼠动物模型 | 第67-68页 |
| ·观察肿瘤的生长情况 | 第68页 |
| ·处理肿瘤标本 | 第68页 |
| ·RT-PCR 检测肿瘤组织中HPV16-E6/E7 MRNA | 第68页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析肿瘤组织中HPV16-E6/E7 蛋白 | 第68页 |
| ·免疫组织荧光观察肿瘤组织中HPV16-E6/E7 蛋白 | 第68页 |
| ·组织切片HE 染色观察组织学改变 | 第68-69页 |
| ·检测肿瘤组织中凋亡相关基因的转录与表达 | 第69页 |
| ·构建共表达质粒PCDNA3.1-HPV16-L1-U6-SIRNA-E6 | 第69-70页 |
| ·设计引物 | 第69页 |
| ·扩增U6-SIRNA-E6 序列 | 第69-70页 |
| ·构建并鉴定PMD18-T-U6-SIRNA-E6 | 第70页 |
| ·构建并鉴定PCDNA3.1-HPV16-L1-U6-SIRNA-E6 | 第70页 |
| ·携带不同质粒的PHOP/PHOQ 的抑瘤作用 | 第70-72页 |
| ·质粒电转化至减毒沙门氏菌PHOP/PHOQ | 第70-71页 |
| ·建立裸鼠皮下移植瘤模型 | 第71页 |
| ·观察肿瘤生长 | 第71页 |
| ·收集标本 | 第71页 |
| ·RT-PCR 检测肿瘤组织中HPV16-E6/E7/L1 MRNA | 第71页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析肿瘤组织中HPV16-E6/E7/L1 蛋白 | 第71页 |
| ·免疫组织化学方法观察肿瘤组织中HPV16-E6/E7/L1 蛋白 | 第71页 |
| ·组织切片HE 染色观察肿瘤组织学改变 | 第71页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清中抗HPV16-L1 抗体和细胞因子 | 第71-72页 |
| 3 结果处理及统计 | 第72-73页 |
| 第三章 实验结果 | 第73-110页 |
| 1 构建原核表达质粒PET28A-HPV16-L1 | 第73-76页 |
| ·钓取HPV16-L1 基因 | 第73页 |
| ·酶切鉴定PMD18-T-HPV16-L1 | 第73-74页 |
| ·测序鉴定PMD18-T-HPV16-L1 | 第74-75页 |
| ·酶切鉴定PET28A-HPV16-L1 | 第75-76页 |
| 2 检测HPV16-L1 原核表达蛋白的免疫原性 | 第76-79页 |
| ·菌液PCR 鉴定BL21(PET28A-HPV16-L1) | 第76页 |
| ·SDS PAGE 检测HPV16-L1 重组蛋白 | 第76-77页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析HPV16-L1 重组蛋白 | 第77页 |
| ·纯化并复性HPV16-L1 重组蛋白 | 第77-78页 |
| ·ELISA 鉴定HPV16-L1 重组蛋白 | 第78页 |
| ·电镜观察HPV16-L1 VLP 形态 | 第78-79页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清及阴道冲洗液中抗HPV16-L1 抗体 | 第79页 |
| 3 构建HPV16-L1 真核表达载体 | 第79-84页 |
| ·扩增HPV16-L1 目的片段 | 第79-80页 |
| ·酶切鉴定HPV16-L1 克隆质粒 | 第80页 |
| ·测序鉴定HPV16-L1 克隆质粒 | 第80-82页 |
| ·酶切鉴定PCDNA3.1-HPV16-L1 | 第82页 |
| ·SDS PAGE 检测真核表达HPV16-L1 蛋白 | 第82-83页 |
| ·WESTEN BLOTTING 检测真核表达HPV16-L1 蛋白 | 第83页 |
| ·免疫细胞化学检测真核表达HPV16-L1 蛋白 | 第83-84页 |
| ·电镜观察真核表达HPV16-L1 VLP | 第84页 |
| 4 减毒沙门氏菌携带PCDNA3.1-HPV16-L1 的免疫原性检测 | 第84-87页 |
| ·PCR 鉴定携带PCDNA3.1-HPV16-L1 的减毒沙门氏菌 | 第84-85页 |
| ·3 次免疫后检测血清及阴道冲洗液中抗HPV16-L1 抗体 | 第85-86页 |
| ·3 次免疫后检测小鼠血清细胞因子 | 第86页 |
| ·单次免疫后检测血清及阴道冲洗液中抗HPV16-L1 抗体 | 第86-87页 |
| ·单次免疫后检测小鼠血清细胞因子 | 第87页 |
| 5 RNA 沉默HPV16-E6/E7 抗子宫颈癌的作用 | 第87-102页 |
| ·构建PGC-SIRNA 重组质粒 | 第87-88页 |
| ·酶切鉴定PGC-SIRNA | 第87-88页 |
| ·测序鉴定PGCSILENCER-SIRNA | 第88页 |
| ·PGC-SIRNA 对HPV16-E6/E7 的转录后沉默 | 第88-91页 |
| ·转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞的形态及转染效率 | 第88-89页 |
| ·转染PGC-SIRNA 后检测SIHA 细胞中HPV16-E6/E7 MRNA | 第89-90页 |
| ·转染 PGC-SIRNA 后 WESTERN BLOTTING 检测 SIHA 细胞中HPV16-E6/E7 蛋白 | 第90页 |
| ·转染PGC-SIRNA 后免疫荧光检测SIHA 细胞中HPV16-E6 | 第90-91页 |
| ·SIRNA 质粒抑制体外培养人子宫颈癌SIHA 细胞 | 第91-97页 |
| ·MTT 检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞的存活率 | 第91-92页 |
| ·流式细胞术检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞的凋亡 | 第92页 |
| ·TUNEL 检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞的凋亡 | 第92-93页 |
| ·HE 染色观察转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞的形态改变 | 第93页 |
| ·电镜观察转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞超微结构的改变 | 第93-94页 |
| ·RT-PCR 检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞中相关基因MRNA | 第94页 |
| ·WESTEN BLOTTING 检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞中相关蛋白 | 第94-95页 |
| ·免疫细胞化学染色检测转染PGC-SIRNA 后SIHA 细胞中相关蛋白 | 第95-97页 |
| ·PGC-SIRNA 抑制人子宫颈癌体内移植瘤 | 第97-102页 |
| ·转染PGC-SIRNA 后移植瘤的生长情况及抑瘤率 | 第97页 |
| ·RT-PCR 检测转染PGC-SIRNA 后移植瘤中HPV16-E6 | 第97-98页 |
| ·WESTERN BLOTTING 检测转染PGC-SIRNA 后移植瘤中HPV16-E6/E7 蛋白 | 第98页 |
| ·免疫组织荧光检测转染PGC-SIRNA后移植瘤组织中HPV16-E6/E7蛋白 | 第98-99页 |
| ·组织切片HE 染色观察转染PGC-SIRNA 后移植瘤组织学改变 | 第99页 |
| ·半定量RT-PCR 检测移植瘤组织中相关基因MRNA | 第99-100页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析肿瘤组织中相关蛋白 | 第100-101页 |
| ·免疫组织化学观察移植瘤组织中凋亡相关蛋白 | 第101-102页 |
| 6 PHOP/PHOQ 携带PCDNA3.1-HPV16-L1-U6-SIRNA-E6的抑瘤作用 | 第102-110页 |
| ·构建PCDNA3.1-HPV16-L1-U6-SIRNA-E6 重组质粒 | 第102-104页 |
| ·钓取U6-SIRNA-E6A 序列 | 第102页 |
| ·酶切鉴定PMD18-T-U6-SIRNA-E6A | 第102-103页 |
| ·测序鉴定PMD18-T-U651E6 | 第103页 |
| ·酶切鉴定PCDNA3.1-L1-U651E6 | 第103-104页 |
| ·菌液PCR 鉴定PHOP/PHOQ（PCDNA3.1-L1-U651E6） | 第104-105页 |
| ·减毒沙门氏菌PHOP/PHOQ 携带重组质粒的体内抑瘤实验 | 第105-110页 |
| ·接种PHOP/PHOQ 后肿瘤的生长情况及抑瘤率 | 第105页 |
| ·RT-PCR 检测接种 PHOP/PHOQ 后肿瘤组织 HPV16-L1/E6/E7MRNA | 第105-106页 |
| ·WESTERN BLOTTING 分析接种 PHOP/PHOQ 后肿瘤组织中HPV16-L1/E6/E7 蛋白 | 第106-107页 |
| ·免疫组织化学方法观察接种 PHOP/PHOQ 肿瘤中 HPV16-E6/E7/L1蛋白 | 第107-108页 |
| ·组织切片HE 染色观察接种减毒沙门代菌后组织学改变 | 第108页 |
| ·ELISA 检测接种减毒沙门氏菌后小鼠血清抗HPV16-L1 抗体 | 第108-109页 |
| ·ELISA 检测接种PHOP/PHOQ 后小鼠血清IL-2 和IFN-Γ含量 | 第109-110页 |
| 第四章 讨论 | 第110-121页 |
| 1 HPV16 L1 自组装成 VLP 诱导小鼠产生抗体 | 第111-112页 |
| 2 减毒沙门氏菌携带HPV16 L1 真核表达质粒诱导小鼠免疫应答 | 第112-115页 |
| 3 HPV16-E6/E7 转录后沉默抑制子宫颈癌的增殖 | 第115-119页 |
| ·PGC-SIRNA 下调SIHA 细胞中E6/E7 表达 | 第115-116页 |
| ·HPV16-E6/E7 转录后沉默导致SIHA 细胞凋亡 | 第116-117页 |
| ·SIRNA 导致SIHA 细胞凋亡的机制 | 第117-119页 |
| 4 减毒沙门氏菌携带PCDNA3.1-HPV16-L1-SIRNA-E6 抑制子宫颈癌增殖 | 第119-121页 |
| 结论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-135页 |
| 在读期间发表文章 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
| 中文摘要 | 第139-142页 |
| ABSTRACT | 第142-145页 |
