论文创新点 | 第5-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 引言 | 第13-33页 |
1.1 研究背景 | 第13-29页 |
1.1.1 乙型肝炎病毒的发现及其本质 | 第13-15页 |
1.1.2 HBV的特点和流行病学分布 | 第15-18页 |
1.1.2.1 HBV简介 | 第15-17页 |
1.1.2.2 HBV的受体 | 第17-18页 |
1.1.2.3 HBV的分型和流行病学分布 | 第18页 |
1.1.3 HBV的临床研究现状 | 第18-21页 |
1.1.3.1 HBV感染的血清学研究 | 第18-19页 |
1.1.3.2 HBV的病理特征 | 第19-21页 |
1.1.4 HBV的治疗和预防 | 第21-26页 |
1.1.4.1 HBV的治疗 | 第21-23页 |
1.1.4.2 HBV疫苗的开发 | 第23-26页 |
1.1.5 DC的发现和功能 | 第26-28页 |
1.1.6 DC细胞表面受体DEC205 | 第28-29页 |
1.2 研究目的和意义 | 第29-32页 |
1.3 研究方法和内容 | 第32-33页 |
2 材料与方法 | 第33-46页 |
2.1 材料 | 第33-38页 |
2.1.1 细胞株、菌种及SPF级小鼠 | 第33页 |
2.1.2 质粒 | 第33页 |
2.1.3 工具酶、Marker、化学试剂、抗体、试剂盒等 | 第33-34页 |
2.1.4 培养基 | 第34页 |
2.1.4.1 细菌培养基 | 第34页 |
2.1.4.2 细胞培养基 | 第34页 |
2.1.5 缓冲液 | 第34-36页 |
2.1.6 实验仪器 | 第36-37页 |
2.1.7 T细胞特异性结合多肽预测 | 第37页 |
2.1.8 引物 | 第37-38页 |
2.2 方法 | 第38-46页 |
2.2.1 质粒提取及浓度检测 | 第38页 |
2.2.2 感受态细胞制备 | 第38页 |
2.2.3 感受态细胞转化 | 第38页 |
2.2.4 放线菌基因组DNA提取 | 第38-39页 |
2.2.5 聚合酶链式反应(PCR) | 第39-40页 |
2.2.6 DNA胶回收 | 第40页 |
2.2.7 PCR产物连接T载体 | 第40页 |
2.2.8 酶切反应与连接反应 | 第40页 |
2.2.9 DNA电泳和蛋白电泳 | 第40-41页 |
2.2.10 Western blot | 第41-42页 |
2.2.11 his标签蛋白表达、纯化和复性 | 第42页 |
2.2.12 抗体的纯化和生物素化 | 第42-43页 |
2.2.13 免疫荧光细胞化学实验 | 第43-44页 |
2.2.14 小鼠皮下注射及采血 | 第44页 |
2.2.15 小鼠高压水动力尾静脉注射 | 第44页 |
2.2.16 酶联免疫反应Elisa | 第44页 |
2.2.17 酶联免疫斑点Elispot | 第44-45页 |
2.2.18 统计学分析 | 第45-46页 |
3 结果 | 第46-64页 |
3.1 重组蛋白的表达、纯化及复性 | 第46-49页 |
3.1.1 构建pET-his突变质粒 | 第46页 |
3.1.2 重组质粒的构建 | 第46-47页 |
3.1.3 融合蛋白的表达、纯化及复性 | 第47-49页 |
3.2 抗体的生物素化 | 第49-51页 |
3.3 靶向疫苗复合物与小鼠CD205体外结合实验 | 第51页 |
3.4 小鼠的免疫接种、尾静脉注射及各组免疫效果比较 | 第51-64页 |
3.4.1 preS-cSA融合蛋白在C57BL/6小鼠中的免疫保护作用 | 第51-53页 |
3.4.2 靶向锚定于DC的preS-cSA融合蛋白在BALB/c小鼠中的免疫保护作用 | 第53-57页 |
3.4.2.1 靶向锚定于DC的preS-cSA融合蛋白激活的体液免疫反应 | 第54-56页 |
3.4.2.2 靶向锚定于DC的preS-cSA融合蛋白与非靶向融合蛋白的免疫保护作用比较 | 第56-57页 |
3.4.3 靶向锚定于DC的preS-cSA融合蛋白激活的细胞免疫反应 | 第57-60页 |
3.4.4 靶向锚定于DC的tCore-cSA融合蛋白的免疫保护作用 | 第60-61页 |
3.4.5 靶向锚定于DC的疫苗对HBV感染的治疗作用 | 第61-64页 |
4 讨论 | 第64-72页 |
5 展望 | 第72-75页 |
参考文献 | 第75-84页 |
致谢 | 第84页 |