| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-23页 |
| 1.1 聚己内酯 | 第16-17页 |
| 1.1.1 聚己内酯在给药系统中的应用 | 第16页 |
| 1.1.2 聚己内酯在组织工程中的应用 | 第16-17页 |
| 1.1.3 聚己内酯在纳米材料中的应用 | 第17页 |
| 1.2 肝素 | 第17-18页 |
| 1.2.1 肝素的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 肝素的生物活性 | 第18页 |
| 1.3 肝素的化学酶法合成 | 第18-19页 |
| 1.4 肝素固定化 | 第19-21页 |
| 1.4.1 肝素固定化的目的 | 第19-20页 |
| 1.4.2 肝素固定化的方法 | 第20页 |
| 1.4.3 固定化肝素含量的测定 | 第20-21页 |
| 1.5 研究的目的、内容和意义 | 第21-23页 |
| 1.5.1 研究的目的和意义 | 第21页 |
| 1.5.2 研究的内容 | 第21-23页 |
| 第二章 PCL表面固定肝素 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 醛基化肝素的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 肝素固定到PCL表面 | 第25页 |
| 2.2.3 甲苯胺蓝法测量肝素浓度的标准曲线 | 第25-26页 |
| 2.2.4 PCL-HEP肝素含量测定 | 第26页 |
| 2.2.5 XPS检测PCL-HEP | 第26页 |
| 2.2.6 傅里叶红外光谱检测PCL-HEP | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.3.1 肝素固定到PCL表面 | 第27页 |
| 2.3.2 甲苯胺蓝法测量肝素浓度的标准曲线 | 第27-28页 |
| 2.3.3 XPS检测PCL-HEP | 第28-31页 |
| 2.3.4 傅里叶红外光谱检测PCL-HEP | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 EcN::T7ΔgorΔtrxB缺陷型菌株的构建 | 第33-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第34页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.3 主要溶液及培养基 | 第35-36页 |
| 3.1.4 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 化学感受态的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.2 化学转化 | 第38页 |
| 3.2.3 电击感受态的制备 | 第38页 |
| 3.2.4 电击转化 | 第38-39页 |
| 3.2.5 PCR扩增目的片段trxB和gor | 第39-40页 |
| 3.2.6 trxB和gor基因敲除 | 第40-41页 |
| 3.2.7 抗性基因的去除 | 第41页 |
| 3.2.8 敲除EcN::T7Δgor菌株中的trxB基因 | 第41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-47页 |
| 3.3.1 EcN::T7菌株中trxB基因和gor基因的敲除 | 第41-44页 |
| 3.3.2 EcN::T7Δgor::kan菌株抗性基因的去除 | 第44页 |
| 3.3.3 EcN::T7ΔtrxB::kan菌株抗性基因的去除 | 第44-45页 |
| 3.3.4 敲除EcN::T7Δgor菌株中的trxB基因 | 第45-46页 |
| 3.3.5 EcN::T7ΔgorΔtrxB::kan抗性基因的去除 | 第46-47页 |
| 3.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 五种肝素修饰酶在大肠杆菌中的表达 | 第48-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-50页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.3 主要溶液及培养基 | 第49-50页 |
| 4.1.4 菌株及质粒 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 重组质粒转入表达菌株中 | 第50页 |
| 4.2.2 诱导表达五种肝素修饰酶 | 第50页 |
| 4.2.3 蛋白电泳 | 第50-51页 |
| 4.2.4 蛋白纯化 | 第51-53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 4.3.1 NST的表达纯化 | 第53-54页 |
| 4.3.2 3OST的表达纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.3 6OST的表达纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.4 2OST的表达纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.5 C5epi的表达 | 第57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第五章 总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第67-68页 |
