| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 引言 | 第10-11页 |
| 1.2 研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 金龟子绿僵菌CQMa102 致病机制的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.2 丝状真菌正常产孢机制的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.3 微循环产孢机制的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.4 CtnB基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.5 基因敲除技术在基因功能研究中的应用 | 第15页 |
| 1.3 立题依据及研究目的 | 第15-16页 |
| 1.4 研究内容 | 第16-17页 |
| 1.4.1 MaCtnB克隆及其敲除载体构建 | 第16页 |
| 1.4.2 MaCtnB功能研究 | 第16-17页 |
| 1.5 技术路线 | 第17页 |
| 1.6 本研究创新之处 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 供试菌株和昆虫 | 第19页 |
| 2.1.2 主要实验试剂和试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要培养基及溶液 | 第21-23页 |
| 2.1.5 主要使用软件 | 第23页 |
| 2.2 主要方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 MaCtnB基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.2.2 真菌基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 MaCtnB基因敲除载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.4 农杆菌的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 农杆菌与绿僵菌共培养 | 第29页 |
| 2.2.6 MaCtnB敲除菌株的筛选 | 第29-31页 |
| 2.2.7 回复载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.8 微循环产孢 | 第33页 |
| 2.2.9 加桔霉素处理菌株 | 第33页 |
| 2.2.10 萌发率的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.11 产孢量的测定 | 第34页 |
| 2.2.12 抗湿热能力分析 | 第34页 |
| 2.2.13 抗紫外能力测定 | 第34-35页 |
| 2.2.14 菌株耐高渗溶液、细胞壁破坏剂、氧化应激的测定 | 第35页 |
| 2.2.15 毒力测定 | 第35-36页 |
| 2.2.16 血淋巴中虫菌体和血细胞的观察 | 第36页 |
| 2.2.17 虫菌体DNA的提取 | 第36页 |
| 2.2.18 定量PCR | 第36-37页 |
| 2.2.19 蝗虫后翅上孢子萌发率和附着胞形成率的测定 | 第37页 |
| 2.2.20 Wright- Giemsa染色观察蝗虫血细胞 | 第37页 |
| 2.2.21 寄主血淋巴黑化反应的测定 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-55页 |
| 3.1 MaCtnB基因的生物信息学分析 | 第38-40页 |
| 3.2 MaCtnB敲除和回复载体的构建及分子验证 | 第40-41页 |
| 3.3 MaCtnB基因的敲除转变了绿僵菌在微循环产孢培养基上的的产孢方式 | 第41-42页 |
| 3.4 桔霉素影响了敲除菌株的产孢方式 | 第42页 |
| 3.5 MaCtnB的缺失影响绿僵菌的萌发 | 第42-44页 |
| 3.6 MaCtnB的缺失影响了绿僵菌产孢量 | 第44-45页 |
| 3.7 MaCtnB的敲除增强了对UV-B和热激的敏感性 | 第45-46页 |
| 3.8 MaCtnB对高渗溶液、细胞壁破坏剂、氧化应激不敏感 | 第46-47页 |
| 3.9 MaCtnB影响了绿僵菌的毒力 | 第47-48页 |
| 3.10 MaCtnB影响了蝗虫后翅上孢子的萌发和附着胞的形成 | 第48-50页 |
| 3.11 MaCtnB影响绿僵菌在血淋巴中的生长 | 第50-52页 |
| 3.12 MaCtnB的缺失影响了血淋巴中血细胞的数量 | 第52页 |
| 3.13 MaCtnB的敲除影响了寄主血细胞的吞噬作用 | 第52页 |
| 3.14 MaCtnB的缺失影响了昆虫的先天免疫反应 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 MaCtnB和桔霉素影响了绿僵菌的产孢方式 | 第55-56页 |
| 4.2 MaCtnB影响绿僵菌对UV-B辐射和热激的敏感性 | 第56页 |
| 4.3 MaCtnB影响绿僵菌的毒力 | 第56-57页 |
| 4.4 基因敲除技术 | 第57-58页 |
| 5 主要结论及后续工作展望 | 第58-59页 |
| 5.1 主要研究结论 | 第58页 |
| 5.2 后续试验建议 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
