| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-16页 |
| 1.1.1 结肠癌流行病学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 肿瘤转移与EMT | 第11页 |
| 1.1.3 Twist简述 | 第11-13页 |
| 1.1.4 HIF简述 | 第13页 |
| 1.1.5 钙信号在肿瘤中的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.6 Trp通道简述 | 第14-15页 |
| 1.1.7 TrpC5的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 研究意义 | 第16页 |
| 1.3 研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 伦理学声明 | 第18页 |
| 2.1.2 细胞株及质粒 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.4 主要仪器与耗材 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第22-23页 |
| 2.2.3 蛋白提取 | 第23页 |
| 2.2.4 蛋白浓度测定(BCA定量试剂盒) | 第23页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹(WesternBlot,WB) | 第23-24页 |
| 2.2.6 细胞RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR(Quantitativereal-timePCR) | 第25-26页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.2.9 细胞免疫荧光染色 | 第26-27页 |
| 2.2.10 石蜡切片的制作 | 第27页 |
| 2.2.11 免疫组化 | 第27-28页 |
| 2.2.12 细胞内游离钙离子浓度测定 | 第28-29页 |
| 2.2.13 细胞划痕实验 | 第29页 |
| 2.2.14 Transwell迁移实验 | 第29页 |
| 2.2.15 Transwell侵袭实验 | 第29页 |
| 2.2.16 细胞增殖实验 | 第29-30页 |
| 2.2.17 平板克隆形成实验 | 第30页 |
| 2.2.18 体内成瘤实验 | 第30-31页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第31-47页 |
| 3.1 TrpC5与结肠癌转移及临床预后的相关性研究 | 第31-35页 |
| 3.1.1 免疫组化分析临床结肠癌组织中TrpC5蛋白表达水平 | 第31页 |
| 3.1.2 WesternBlot检测临床结肠癌组织中TrpC5蛋白表达水平 | 第31-32页 |
| 3.1.3 TrpC5与结肠癌临床转移的相关性分析 | 第32-33页 |
| 3.1.4 TrpC5与结肠癌患者总生存期的相关性分析 | 第33-34页 |
| 3.1.5 TrpC5与结肠癌患者无转移生存期的相关性分析 | 第34页 |
| 3.1.6 分析与讨论 | 第34-35页 |
| 3.2 结肠癌细胞株TrpC5表达水平与转移的相关性研究 | 第35-39页 |
| 3.2.1 结肠癌细胞株TrpC5的转录和翻译水平表达分析 | 第35页 |
| 3.2.2 shRNA外源性降低细胞TrpC5后其蛋白和功能水平分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 shRNA外源性降低细胞TrpC5后的迁移和侵袭能力分析 | 第36-37页 |
| 3.2.4 lentivirusTrpC5外源性升高细胞TrpC5后其蛋白和功能水平分析 | 第37-38页 |
| 3.2.5 lentivirusTrpC5外源性升高细胞TrpC5后的迁移和侵袭能力分析 | 第38-39页 |
| 3.2.6 分析与讨论 | 第39页 |
| 3.3 结肠癌细胞株TrpC5表达水平与增殖的相关性研究 | 第39-41页 |
| 3.3.1 调节TrpC5表达对结肠癌细胞增殖活力的影响 | 第39页 |
| 3.3.2 调节TrpC5表达对细胞体外克隆形成能力影响的分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 调节TrpC5表达对细胞体内成瘤能力影响的分析 | 第40-41页 |
| 3.3.4 分析与讨论 | 第41页 |
| 3.4 结肠癌细胞TrpC5表达与EMT的相关性研究 | 第41-43页 |
| 3.4.1 调节TrpC5表达对结肠癌细胞EMT过程中形态的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.2 免疫荧光分析调节TrpC5表达后细胞EMT标志物的表达水平 | 第42页 |
| 3.4.3 WesternBlot分析调节TrpC5表达后细胞EMT标志物的表达水平 | 第42-43页 |
| 3.4.4 分析与讨论 | 第43页 |
| 3.5 结肠癌细胞中TrpC5调控转移的分子机制研究 | 第43-47页 |
| 3.5.1 调节TrpC5表达后转录因子的表达水平分析 | 第43-44页 |
| 3.5.2 抑制TrpC5、HIF-1α和Twist后上皮标志物蛋白水平分析 | 第44-45页 |
| 3.5.3 抑制TrpC5、HIF-1α和Twist后细胞迁移能力分析 | 第45-46页 |
| 3.5.4 抑制TrpC5、HIF-1α和Twist后细胞增殖能力分析 | 第46页 |
| 3.5.5 分析与讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 总结与展望 | 第47-49页 |
| 4.1 主要结论 | 第47页 |
| 4.2 展望 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
