| 缩略词表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 前言 | 第19-26页 |
| 第一部分 神经痛模型动物脊髓VGLUT2表达变化 | 第26-47页 |
| 1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.1 试剂配方 | 第30-31页 |
| 2.2 机械痛阈测定 | 第31-32页 |
| 2.3 坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型构建 | 第32页 |
| 2.4 真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His-VGLUT2构建 | 第32-34页 |
| 2.5 PC12细胞转染 | 第34-36页 |
| 2.6 蛋白免疫印迹实验 | 第36-38页 |
| 2.7 免疫组化实验 | 第38-39页 |
| 2.8 组织免疫荧光双重标记实验 | 第39-40页 |
| 2.9 定量和统计分析 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.1 VGLUT2抗体验证 | 第40-42页 |
| 3.2 SNI神经病理性痛模型的构建及验证 | 第42-43页 |
| 3.3 SNI术后不同时间点脊髓VGLUT2表达变化 | 第43-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第二部分 VGLUT2shRNA慢病毒对神经痛及谷氨酸释放的影响 | 第47-69页 |
| 1 实验材料 | 第47-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-58页 |
| 2.1 试剂配方 | 第51-52页 |
| 2.2 含GFP荧光标记的VGLUT2shRNA慢病毒载体构建 | 第52-53页 |
| 2.3 表达VGLUT2shRNA的慢病毒载体包装 | 第53页 |
| 2.4 原代神经元培养 | 第53-54页 |
| 2.5 细胞免疫荧光实验 | 第54页 |
| 2.6 原代培养神经元的病毒感染 | 第54页 |
| 2.7 Real-timePCR和蛋白免疫印迹检测原代培养神经元VGLUT2表达 | 第54-56页 |
| 2.8 机械痛阈测定 | 第56页 |
| 2.9 SNI模型构建 | 第56页 |
| 2.10 鞘内注射VGLUT2shRNA慢病毒 | 第56页 |
| 2.11 丘脑VPL脑区微量注射VGLUT2shRNA慢病毒 | 第56-57页 |
| 2.12 原代培养神经元谷氨酸释放实验 | 第57页 |
| 2.13 脊髓、丘脑突触体谷氨酸释放实验 | 第57-58页 |
| 2.14 定量和统计分析 | 第58页 |
| 3 实验结果 | 第58-68页 |
| 3.1 VGLUT2shRNA重组慢病毒载体制备与筛选 | 第58-61页 |
| 3.2 鞘内注射VGLUT2shRNA慢病毒对SNI小鼠机械痛阈的影响 | 第61-63页 |
| 3.3 丘脑VPL脑区注射VGLUT2shRNA慢病毒对SNI小鼠机械痛阈的影响 | 第63-66页 |
| 3.4 VGLUT2shRNA慢病毒对谷氨酸释放的影响 | 第66-68页 |
| 4 小结 | 第68-69页 |
| 第三部分 神经痛模型动物Wnt/β-catenin信号通路的变化及其在VGLUT2表达调控中的作用 | 第69-83页 |
| 1 实验材料 | 第69-70页 |
| 2 实验方法 | 第70-72页 |
| 2.1 药品配置 | 第70-71页 |
| 2.2 机械痛阈测定 | 第71页 |
| 2.3 SNI模型构建 | 第71页 |
| 2.4 Real-timePCR检测脊髓Wnt基因mRNA水平 | 第71页 |
| 2.5 蛋白免疫印记检测Wnt1、β-catenin蛋白表达 | 第71页 |
| 2.6 鞘内注射VGLUT2shRNA慢病毒、XAV939、Wnt激动剂、Wnt1、BDNF | 第71-72页 |
| 2.7 定量和统计分析 | 第72页 |
| 3 实验结果 | 第72-82页 |
| 3.1 小鼠SNI术后不同时间Wnt/β-catenin信号分子的表达变化 | 第72-75页 |
| 3.2 Wnt/β-catenin信号通路对VGLUT1、VGLUT2蛋白表达的影响 | 第75-77页 |
| 3.3 BDNF对VGLUT1、VGLUT2蛋白表达的影响 | 第77-78页 |
| 3.4 Wnt/β-catenin信号通路介导的VGLUT2表达调控在神经痛中的作用 | 第78-82页 |
| 4 小结 | 第82-83页 |
| 讨论 | 第83-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 主要简历 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
