| 附件 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 插图和附表清单 | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 1 引言 | 第18-47页 |
| 1.1 逆转录病毒概述 | 第18-20页 |
| 1.1.1 基因组的组成 | 第18-19页 |
| 1.1.2 生命周期 | 第19-20页 |
| 1.2 内源性逆转录病毒 | 第20-22页 |
| 1.2.1 基因组组成 | 第21页 |
| 1.2.2 ERVs在细胞抵抗外源性感染过程中的作用 | 第21页 |
| 1.2.3 ERVs在人类胎盘形成中的作用 | 第21-22页 |
| 1.3 绵羊肺腺瘤逆转录病毒(JSRV) | 第22-27页 |
| 1.3.1 OPA的发现及命名 | 第23页 |
| 1.3.2 OPA的病原的确定 | 第23-24页 |
| 1.3.3 OPA的临床症状及病理变化 | 第24-25页 |
| 1.3.4 OPA的临床诊断 | 第25页 |
| 1.3.5 OPA的控制和治疗 | 第25页 |
| 1.3.6 OPA的流行病学特点 | 第25-26页 |
| 1.3.7 JSRV基因组组成 | 第26-27页 |
| 1.4 JSRV与受体相互作用 | 第27-28页 |
| 1.5 内源性JSRV(enJSRV) | 第28-29页 |
| 1.5.1 enJSRV的概述 | 第28-29页 |
| 1.5.2 enJSRVs在生殖道中的表达 | 第29页 |
| 1.6 绵羊透明质酸酶2(Hyal-2)的作用 | 第29-35页 |
| 1.6.1 透明质酸酶简介 | 第29-30页 |
| 1.6.2 透明质酸酶2的作用 | 第30-35页 |
| 1.7 JSRV及enJSRV的相互作用 | 第35-36页 |
| 1.8 JSRV的Env蛋白转化细胞的不同机制 | 第36页 |
| 1.9 参与JSRV Env介导细胞转化信号通路 | 第36-41页 |
| 1.9.1 PI3K依赖和非依赖型蛋白激酶通路 | 第36-38页 |
| 1.9.2 Raf-MEK-MAPK途径 | 第38-39页 |
| 1.9.3 RON-Hyal-2途径 | 第39-41页 |
| 1.10 巢式PCR | 第41-42页 |
| 1.11 重叠PCR技术 | 第42-43页 |
| 1.11.1 重叠PCR技术 | 第42-43页 |
| 1.11.2 重叠PCR技术原理 | 第43页 |
| 1.12 蛋白相互作用研究方法 | 第43-46页 |
| 1.12.1 蛋白质亲和色谱 | 第43-44页 |
| 1.12.2 GST pull down技术 | 第44页 |
| 1.12.3 酵母双杂交技术 | 第44-45页 |
| 1.12.4 免疫共沉淀技术 | 第45页 |
| 1.12.5 荧光共振能量转移技术 | 第45-46页 |
| 1.12.6 双分子荧光互补技术 | 第46页 |
| 1.13 真核细胞转染技术 | 第46页 |
| 1.14 研究目的及意义 | 第46-47页 |
| 2 实验一 绵羊透明质酸酶2的基因扩增与序列分析 | 第47-59页 |
| 摘要 | 第47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第47-49页 |
| 2.1.1 材料 | 第47-48页 |
| 2.1.2 方法 | 第48-49页 |
| 2.1.3 连接反应 | 第49页 |
| 2.1.4 转化感受态细胞 | 第49页 |
| 2.1.5 菌液PCR鉴定 | 第49页 |
| 2.1.6 双酶切鉴定 | 第49页 |
| 2.1.7 DNA序列测定与分析 | 第49页 |
| 2.2 结果 | 第49-56页 |
| 2.2.1 重叠PCR(overlapping PCR)扩增hyal-2基因 | 第50页 |
| 2.2.2 hyal-2克隆载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.3 DNA序列测定与分析 | 第51-53页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第53-56页 |
| 2.3 讨论 | 第56-57页 |
| 2.4 结论 | 第57-59页 |
| 3 实验二 绵羊透明质酸酶2的真核表达及鉴定 | 第59-69页 |
| 摘要 | 第59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第59-62页 |
| 3.1.1 材料 | 第59-61页 |
| 3.1.2 方法 | 第61-62页 |
| 3.2 结果 | 第62-66页 |
| 3.2.1 PCR(overlapping PCR)扩增hyal-2基因 | 第62-63页 |
| 3.2.2 hyal-2真核表达载体的构建及鉴定 | 第63-66页 |
| 3.3 讨论 | 第66-68页 |
| 3.4 结论 | 第68-69页 |
| 4 实验三 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白及其亚基真核表达载体的构建及表达产物鉴定 | 第69-83页 |
| 摘要 | 第69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第69-74页 |
| 4.1.1 材料 | 第69-70页 |
| 4.1.2 方法 | 第70-74页 |
| 4.2 结果 | 第74-81页 |
| 4.2.1 含绿色荧光蛋白标记的绵羊Env真核表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 4.2.2 含绿色荧光蛋白标记的SU及TM真核表达载体的构建 | 第76-78页 |
| 4.2.3 激光共聚焦显微镜观察结果 | 第78-80页 |
| 4.2.4 Western-blotting鉴定结果 | 第80-81页 |
| 4.3 讨论 | 第81页 |
| 4.4 结论 | 第81-83页 |
| 5 实验四 绵羊透明质酸酶2与绵羊肺腺瘤囊膜蛋白及其亚基相互作用的研究 | 第83-99页 |
| 摘要 | 第83页 |
| 5.1 免疫共沉淀方法的检测 | 第83-91页 |
| 5.1.1 材料与方法 | 第83-86页 |
| 5.1.2 结果 | 第86-91页 |
| 5.2 双分子荧光互补技术检测Env及其亚基与Hyal-2的相互作用 | 第91-97页 |
| 5.2.1 材料与方法 | 第91-95页 |
| 5.2.2 结果 | 第95-97页 |
| 5.3 讨论 | 第97-98页 |
| 5.4 结论 | 第98-99页 |
| 6 实验五 SU蛋白与Hyal-2蛋白可能结合区域的研究 | 第99-121页 |
| 摘要 | 第99页 |
| 6.1 免疫共沉淀方法检测缺失型SU蛋白与Hyal-2相互作用 | 第99-114页 |
| 6.1.1 材料与方法 | 第99-104页 |
| 6.1.2 结果 | 第104-114页 |
| 6.2 双分子荧光互补技术检测可能的结合区域 | 第114-119页 |
| 6.2.1 材料与方法 | 第114-116页 |
| 6.2.2 结果 | 第116-119页 |
| 6.3 讨论 | 第119-120页 |
| 6.4 结论 | 第120-121页 |
| 7 实验六 pEGFP-C1-(env、su、tm)与 pDsRechnonomer-N1-hyal/-2共转小鼠 NIH3T3细胞后对pik3ca、ras基因表达量变化的影响 | 第121-129页 |
| 摘要 | 第121页 |
| 7.1 材料与方法 | 第121-123页 |
| 7.1.1 材料 | 第121-122页 |
| 7.1.2 方法 | 第122-123页 |
| 7.2 结果 | 第123-127页 |
| 7.2.1 实时荧光定量PCR检测单独转染env及其亚基真核表达载体后对pik3ca基因和ras基因mRNA表达的影响 | 第123-125页 |
| 7.2.2 检测单独转染env及其亚基真核表达载体后对pik3ca基因和ras基因mRNA表达的影响 | 第125-127页 |
| 7.2.3 实时荧光定量PCR检测分别共转染env及其亚基与hya1-2真核表达载体后对pik3ca基因和ras基因mRNA表达的影响 | 第127页 |
| 7.3 讨论 | 第127-128页 |
| 7.4 结论 | 第128-129页 |
| 8 全文结论与创新点 | 第129-130页 |
| 8.1 全文结论 | 第129页 |
| 8.2 创新点 | 第129页 |
| 8.3 研究展望 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-145页 |
| 作者简介 | 第145页 |
