| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 引言 | 第13-32页 |
| 1.1 破骨细胞形成和骨吸收机制 | 第13-22页 |
| 1.1.1 破骨细胞和骨骼重建 | 第13-15页 |
| 1.1.2 骨吸收疾病和治疗 | 第15-17页 |
| 1.1.3 破骨细胞的分化形成及其分子机制 | 第17-21页 |
| 1.1.4 破骨细胞的特殊细胞骨架及其分子机制 | 第21-22页 |
| 1.2 PI3K/AKT/GSK3β/NFATc1通路在破骨细胞分化和功能中的相关研究 | 第22-25页 |
| 1.2.1 PI3K蛋白家族 | 第22-23页 |
| 1.2.2 PI3K信号通路在破骨细胞中的信号输入和输出 | 第23-24页 |
| 1.2.3 PI3K/AKT信号通路调控破骨细胞的分化和功能 | 第24-25页 |
| 1.3 Gnal3的研究现状 | 第25-29页 |
| 1.3.1 G蛋白(guanuine nucleotide binding protein,G protein,鸟苷酸结合蛋白)及其受体的结构和功能 | 第25-26页 |
| 1.3.2 G蛋白及其受体在骨组织中的研究现状 | 第26页 |
| 1.3.3 Gna12/Gna13基因的发现和功能研究 | 第26-28页 |
| 1.3.4 Gna13基因的生理功能 | 第28-29页 |
| 1.4 核心结合因子(CBFS)在骨骼发育中的作用 | 第29-30页 |
| 1.5 课题的意义和创新性 | 第30-32页 |
| 2 实验材料和方法 | 第32-58页 |
| 2.1 Gna13基因相关研究的实验材料 | 第32-39页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第32-38页 |
| 2.1.2 实验仪器和耗材 | 第38-39页 |
| 2.2 Gna13基因相关研究的实验方法 | 第39-55页 |
| 2.2.1 Gna13基因表达检测 | 第39-42页 |
| 2.2.2 慢病毒介导破骨细胞Gna13基因表达沉默实验 | 第42-45页 |
| 2.2.3 Gna13基因破骨细胞系细胞特异性敲除小鼠和Gna13、Gna12双敲小鼠的建立和鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.4 Gnal3破骨细胞系细胞特异性敲除小鼠的组织学分析 | 第46-48页 |
| 2.2.5 Gna13缺陷的破骨细胞体外培养的分化、功能、形态、调亡和增殖研究 | 第48-51页 |
| 2.2.6 Gna13缺陷对破骨细胞相关信号通路影响的研究 | 第51-54页 |
| 2.2.7 反转录病毒介导破骨细胞Gna13基因体外过表达及相关检测 | 第54-55页 |
| 2.3 Col2α1 Cbfβ~(f/f)小鼠和Prx1 Cbfβ~(f/f0甜小鼠研究相关的材料和方法 | 第55-58页 |
| 2.3.1 构建Col2α1 Cbfβ~(f/f)甜小鼠和Prx1 Cbfβ~(f/f)肌小鼠 | 第55页 |
| 2.3.2 骨骼分析 | 第55-56页 |
| 2.3.3 组织学和组织准备 | 第56页 |
| 2.3.4 免疫荧光染色 | 第56页 |
| 2.3.5 原代细胞培养 | 第56页 |
| 2.3.6 qRT-PCR | 第56-57页 |
| 2.3.7 准备新出生的小鼠生长板软骨的蛋白质样品 | 第57-58页 |
| 3 实验结果——Gna13负调控破骨细胞的分子机制研究 | 第58-80页 |
| 3.1 Gna13在破骨细胞形成过程中表达增加 | 第58-59页 |
| 3.2 在破骨细胞前体中沉默Gna13基因的表达促进破骨细胞形成 | 第59-60页 |
| 3.3 Gna13基因破骨细胞系细胞特异性敲除及Gna13/Gna12双敲除小鼠骨密度降低 | 第60-62页 |
| 3.4 Gna13基因缺陷促进破骨细胞形成、功能和破骨细胞相关基因表达 | 第62-65页 |
| 3.4.1 Gna13基因缺失促进体内破骨细胞形成 | 第62-63页 |
| 3.4.2 Gna13基因缺失促进体外破骨细胞形成 | 第63-65页 |
| 3.4.3 Gna13基因缺失促进破骨细胞骨吸收功能 | 第65页 |
| 3.5 Gna13基因缺陷促进破骨细胞F-actin环的形成和Cathepsin K的分泌 | 第65-67页 |
| 3.6 Gna13基因缺陷不影响破骨细胞前体的增殖,而破骨细胞凋亡有所增加 | 第67-68页 |
| 3.7 Gna13基因缺陷促进破骨细胞中PI3K-AKT-GSK3β-NFATc1通路的激活 | 第68-71页 |
| 3.8 Gna13基因缺陷导致破骨细胞中RhoA活性的抑制和c-Src和Rac1活性的增强 | 第71-73页 |
| 3.9 Gna13可能通过和PI3K催化亚基p110α相互作用发挥功能 | 第73-74页 |
| 3.10 Gna13CA的过表达强烈抑制破骨细胞的融合、功能并抑制破骨细胞中AKT的磷酸化 | 第74-77页 |
| 3.11 TANK：另一个破骨细胞负调控因子的发现和研究 | 第77-80页 |
| 3.11.1 RANKL诱导下TANK的表达 | 第77-78页 |
| 3.11.2 TANK shRNA-1有效地敲低TANK的表达,促进破骨细胞分化,促进NF-κB活性 | 第78-79页 |
| 3.11.3 TANK基因沉默破骨细胞骨吸收能力增加,酸化功能维持不变 | 第79页 |
| 3.11.4 TANK基因沉默通过调节c-FLIP表达调控破骨细胞的存活 | 第79-80页 |
| 4 讨论和总结——-Gna13负调控破骨细胞的分子机制研究 | 第80-87页 |
| 4.1 方法总结 | 第80-81页 |
| 4.2 Gna13通过调节PI3K-AKT通路抑制了破骨细胞的分化 | 第81-83页 |
| 4.3 RhoA和Racl对破骨细胞骨架构建的影响及Gna13对其的调控作用 | 第83-84页 |
| 4.4 破骨细胞中可能和Gna13偶联的受体 | 第84-85页 |
| 4.4.1 降钙素受体(calcitonin receptor,CTR) | 第84页 |
| 4.4.2 鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR) | 第84页 |
| 4.4.3 雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα) | 第84-85页 |
| 4.5 总结和展望 | 第85-87页 |
| 5 实验结果和讨论——核心结合因子β(Core binding factor betap,CBFβ)正调节骨发育的分子机制研究 | 第87-101页 |
| 5.1 实验结果 | 第87-99页 |
| 5.1.1 CBFβ在小鼠骨骼时空表达 | 第87-88页 |
| 5.1.2 Col2α1 Cbfβ~(f/f3)小鼠和Prx1 Cbfβ~(f/f)f小鼠出现侏儒症,四肢短小 | 第88-91页 |
| 5.1.3 CBFp条件性敲除小鼠影响新生小鼠骨骼发育 | 第91-92页 |
| 5.1.4 Col2α1 Cbfβ~(f/f)盯小鼠和Prx1 Cbfβ~9f/f)小鼠生长板生长和骨小梁发育 | 第92-94页 |
| 5.1.5 Col2α1 Cbfβ~(f/f)小鼠和Prx1 Cbfβ~(f/f)小鼠IHH-cyclin D1信号通路和IHH-PTHrP的反馈调节环失调 | 第94-96页 |
| 5.1.6 Cbfβ~(f/f)条件性敲除小鼠体内骨化延缓 | 第96-99页 |
| 5.1.7 CBFβ缺失影响成骨细胞体外分化 | 第99页 |
| 5.2 总结和讨论 | 第99-101页 |
| 6 参考文献 | 第101-114页 |
| 7 作者简历 | 第114-117页 |
