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纺锤链霉菌SD-07遗传转移体系的建立及产多烯大环内酯类抗生素基因簇的初步研究

摘要第7-10页
Abstract第10-13页
缩略词表第14-16页
1 前言第16-28页
    1.1 链霉菌及纺锤链霉菌SD-07简介第16-18页
        1.1.1 链霉菌简介第16-17页
        1.1.2 纺锤链霉菌SD-07简介第17-18页
    1.2 抗生素及多烯大环内酯类抗生素简介第18-22页
        1.2.1 抗生素简介第18-19页
        1.2.2 多烯大环内酯类抗生素简介第19-22页
    1.3 多烯大环内酯类抗生素合成基因簇的克隆和测序第22-25页
    1.4 链霉菌遗传转移体系建立的方法简介第25-27页
    1.5 本文的研究意义和主要内容第27-28页
2 材料和方法第28-45页
    2.1 材料第28-33页
        2.1.1 菌株第28-29页
        2.1.2 质粒第29页
        2.1.3 PCR引物第29页
        2.1.4 基因组文库抗生素合成基因簇阳性克隆筛选探针序列第29-30页
        2.1.5 培养基和化学试剂第30-33页
    2.2 实验方法第33-45页
        2.2.1 链霉菌培养和菌种保藏第33-34页
        2.2.2 大肠杆菌质粒DNA的提取第34-35页
        2.2.3 链霉菌总DNA提取第35-36页
        2.2.4 DNA片段的回收第36页
        2.2.5 CaCl_2制备大肠杆菌感受态细胞和转化第36-37页
        2.2.6 纺锤链霉菌SD-07基因组文库构建第37-40页
            2.2.6.1 质粒载体的制备第37-38页
            2.2.6.2 链霉菌SD-07基因组DNA的制备第38页
            2.2.6.3 基因组的部分酶切第38-39页
            2.2.6.4 基因组酶切片段的回收及与载体的连接第39页
            2.2.6.5 连接产物的包装第39页
            2.2.6.6 包装产物的转染第39-40页
        2.2.7 纺锤链霉菌SD-07基因组文库CA-SD07抗生素合成基因簇克隆筛选-southern blot第40-42页
            2.2.7.1 准备工作第40-41页
            2.2.7.2 预杂交第41-42页
            2.2.7.3 洗膜及显色第42页
        2.2.8 电穿孔法转化链霉菌SD-07第42页
        2.2.9 大肠杆菌和链霉菌属间接合转移第42-43页
            2.2.9.1 供体菌的准备第42-43页
            2.2.9.2 受体菌的准备第43页
            2.2.9.3 大肠杆菌和链霉菌属间接合转移第43页
        2.2.10 转化子和接合子的PCR验证第43-44页
        2.2.11 生物信息学分析第44-45页
3 实验结果与分析讨论第45-83页
    3.1 纺锤链霉菌全基因组扫描测序和CA-SD07抗生素合成基因簇基因功能的初步分析及预测第45-54页
        3.1.1 全基因组扫描测序概述第45页
        3.1.2 抗生素合成基因簇PKS分析第45-54页
    3.2 纺锤链霉菌全基因组文库及抗生素合成基因簇亚克隆文库第54-60页
        3.2.1 质粒的提取及酶切第54页
        3.2.2 纺锤链霉菌SD-07基因组及其部分酶切第54-55页
        3.2.3 纺锤链霉菌SD-07基因组文库构建第55-57页
        3.2.4 CA-SD07抗生素合成基因簇亚克隆文库的筛选-Southern Blot第57-59页
        3.2.5 纺锤链霉菌基因组文库构建小结第59-60页
    3.3 纺锤链霉菌SD-07遗传操作系统的建立第60-83页
        3.3.1 接合转移第60-65页
            3.3.1.1 纺锤链霉菌SD-07抗生素敏感试验第60-61页
            3.3.1.2 复制型质粒pJTU1278的接合转移第61-62页
            3.3.1.3 整合型质粒的接合转移第62-65页
        3.3.2 接合转移提条件优化第65-77页
            3.3.2.1 接合转移培养基的筛选优化第65-67页
            3.3.2.2 纺锤链霉菌孢子热激和孢子预萌发条件优化第67-70页
            3.3.2.3 供受体比例对接合转移效率的影响第70页
            3.3.2.4 Mg~(2+),Ca~(2+)及甘氨酸对接合转移效率的影响第70-74页
            3.3.2.5 Ca~(2+)在不同链霉菌中对接合转移效率的提高第74-75页
            3.3.2.6 抗生素覆盖时间及其使用浓度第75-76页
            3.3.2.7 接合转移条件优化小结第76-77页
        3.3.3 电转化第77-83页
            3.3.3.1 溶菌酶对菌丝体成活率及电转化率的影响第77-79页
            3.3.3.2 电击强度对体成活率及电转化率的影响第79-80页
            3.3.3.3 抗生素覆盖时间对电转化率的影响第80-82页
            3.3.3.4 电转化结果分析第82-83页
4 全文总结与展望第83-86页
    4.1 本文的主要内容及成果第83-84页
    4.2 对进一步研究的展望第84-86页
参考文献第86-94页
致谢第94-96页
学位论文评阅及答辩情况表第96页

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