| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 Piwi研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1 Piwi的发现 | 第12页 |
| 1.2 Piwi的生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.2.1. Piwi在生殖干细胞维持中的功能 | 第12页 |
| 1.2.2. Piwi在配子发生中的功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3. Piwi在体细胞中的功能 | 第13页 |
| 2 家禽精子发生 | 第13-17页 |
| 2.1 精子发生 | 第13页 |
| 2.2 精子发生过程 | 第13-14页 |
| 2.3 睾丸功能结构 | 第14-15页 |
| 2.4 家禽减数分裂 | 第15-17页 |
| 3 鸡弱精子症研究现状 | 第17页 |
| 4 精液品质 | 第17-18页 |
| 4.1 精液品质评定指标 | 第18页 |
| 4.2 精液品质影响因素 | 第18页 |
| 5 流式细胞术 | 第18-20页 |
| 5.1 流式细胞术发展历史 | 第18-19页 |
| 5.2 流式细胞术原理及应用 | 第19-20页 |
| 5.2.1 流式细胞仪系统流程 | 第19页 |
| 5.2.2 流式细胞仪工作原理 | 第19-20页 |
| 5.3 细胞参量 | 第20页 |
| 6 实时荧光定量PCR | 第20-25页 |
| 6.1 RT-qPCR常用检测方法及原理 | 第21-23页 |
| 6.1.1. SYBR Green染料法 | 第21-22页 |
| 6.1.2. TaqMan探针法 | 第22-23页 |
| 6.2 实时荧光定量PCR的几个常用术语 | 第23-25页 |
| 6.3 实验数据分析方法 | 第25页 |
| 7 本实验的研究目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 鸡弱精子症人工模型的建立及弱精子症形成因素的初步研究 | 第27-39页 |
| 1. 引言 | 第27页 |
| 2. 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1. 实验动物 | 第27页 |
| 2.2. 主要仪器 | 第27页 |
| 2.3. 主要试剂 | 第27-28页 |
| 3. 实验方法 | 第28-31页 |
| 3.1. 白消安建立弱精子症人工模型 | 第28页 |
| 3.1.1. 弱精子症模型建立 | 第28页 |
| 3.1.2. 样品采集及数据测定 | 第28页 |
| 3.2. 精液品质测定 | 第28-29页 |
| 3.2.1. 精液量 | 第28页 |
| 3.2.2. 精子密度 | 第28页 |
| 3.2.3. 精子活力 | 第28-29页 |
| 3.2.4. 精子活率 | 第29页 |
| 3.2.5. 精子畸形率 | 第29页 |
| 3.3. 形态学分析 | 第29-31页 |
| 3.3.1. 睾丸石蜡切片制作 | 第29-31页 |
| 3.3.2. 精液涂片 | 第31页 |
| 3.4. 数据分析 | 第31页 |
| 4. 结果与分析 | 第31-37页 |
| 4.1. 公鸡饲养情况及毒性观察 | 第32页 |
| 4.2. 精液品质测定 | 第32-34页 |
| 4.2.1. 自发弱精子症与正常公鸡精液品质比较分析 | 第32-33页 |
| 4.2.2. 弱精子症模型精液品质比较分析 | 第33-34页 |
| 4.3. 形态学观察 | 第34-37页 |
| 4.3.1. 睾丸组织石蜡切片 | 第34-35页 |
| 4.3.2. 精液涂片 | 第35-37页 |
| 5. 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 Piwill在不同类型生精细胞中mRNA转录的研究 | 第39-53页 |
| 1. 引言 | 第39页 |
| 2. 实验材料 | 第39-40页 |
| 2.1. 实验动物 | 第39页 |
| 2.2. 主要实验仪器 | 第39页 |
| 2.3. 主要实验试剂及配制 | 第39-40页 |
| 3. 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.1. 鸡生精细胞的分离和鉴定 | 第40-42页 |
| 3.1.1 鸡原始生殖细胞(PGCs)分离与鉴定 | 第40页 |
| 3.1.2 鸡精原干细胞(SSCs)分离与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.3 鸡睾丸内生精细胞分离与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.4 鸡成熟精子的纯化 | 第42页 |
| 3.2 总RNA的提取与质量检测 | 第42页 |
| 3.2.1 Trizol法提取总RNA及RNA质量检测 | 第42页 |
| 3.2.2 石蜡切片RNA的提取与质量检测 | 第42页 |
| 3.3 反转录及RT-qPCR | 第42-44页 |
| 3.3.1 RNA样品的反转录 | 第43页 |
| 3.3.2 引物的设计与合成 | 第43-44页 |
| 3.3.3 标准质粒的稀释及拷贝数的计算 | 第44页 |
| 3.3.4 标准曲线的建立 | 第44页 |
| 3.4 RNA样品的检测 | 第44页 |
| 4 实验结果 | 第44-51页 |
| 4.1 鸡PGCs的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2 鸡SSCs的鉴定 | 第45页 |
| 4.3 流式细胞分选 | 第45-47页 |
| 4.3.1 鸡精原(母)细胞 | 第46-47页 |
| 4.3.2 圆形精细胞 | 第47页 |
| 4.4 纯化的精子细胞 | 第47-48页 |
| 4.5 TaqMan RT-qPCR | 第48-51页 |
| 4.5.1 生精细胞RNA检测的TaqMan RT-qPCR方法标准曲线的建立 | 第48页 |
| 4.5.2 生精细胞RNA的Ct值及绝对拷贝数 | 第48-49页 |
| 4.5.3. 弱精子症睾丸组织的TaqMan RT-qPCR标准曲线 | 第49-50页 |
| 4.5.4. 弱精子症Ct值及绝对拷贝数 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 论文发表目录 | 第61-62页 |
