| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 芽孢杆菌的概述 | 第14-15页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌 | 第15-19页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌的菌株发酵 | 第18-19页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统的概述 | 第19-25页 |
| 1.3.1 芽孢杆菌的σ因子 | 第20-21页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌启动子的结构 | 第21-22页 |
| 1.3.3 RBS | 第22页 |
| 1.3.4 枯草芽孢杆菌的表达载体 | 第22-25页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌的启动子 | 第25-27页 |
| 1.4.1 组成型启动子 | 第25页 |
| 1.4.2 诱导型启动子 | 第25-27页 |
| 1.4.3 现有启动子存在的问题和展望 | 第27页 |
| 1.5 通过改造启动子实现目的基因的高效表达 | 第27-30页 |
| 1.5.1 启动子的克隆方法 | 第27-29页 |
| 1.5.2 通过改造启动子策略实现目的基因的高效表达 | 第29-30页 |
| 1.6 启动子的分析和预测方法 | 第30-31页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第31-33页 |
| 1.8 技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 主要酶和试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备型号 | 第35页 |
| 2.1.4 培养基和溶液配制 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-55页 |
| 2.2.1 芽孢杆菌启动子的筛选 | 第35-37页 |
| 2.2.2 芽孢杆菌启动子的克隆 | 第37-39页 |
| 2.2.3 启动子在枯草芽孢杆菌的表达 | 第39-46页 |
| 2.2.4 启动子的改造 | 第46-49页 |
| 2.2.5 重组质粒载体粗酶没活力测定方法 | 第49-51页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备和验证 | 第51-53页 |
| 2.2.7 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化方法 | 第53-55页 |
| 第三章 结果与分析 | 第55-83页 |
| 3.1 芽孢杆菌启动子的筛选 | 第55-63页 |
| 3.1.1 蛋白诱导表达量高的芽孢杆菌的筛选 | 第55-57页 |
| 3.1.2 启动子片段的预测和分析 | 第57-60页 |
| 3.1.3 蛋白诱导表达量高芽孢杆菌的基因组DNA的提取和16S rDNA鉴定 | 第60-63页 |
| 3.2 芽孢杆菌启动子的克隆 | 第63-66页 |
| 3.2.1 BSP3启动子序列的克隆 | 第63-64页 |
| 3.2.2 BSP5B启动子序列的克隆 | 第64-66页 |
| 3.3 启动子在枯草芽孢杆菌的表达 | 第66-74页 |
| 3.3.1 载体pHCMCO4-BSP3-sva和pHCMCO4-P43-sva的构建和表达 | 第66-71页 |
| 3.3.2 载体pHCMCO4-BSP5B-sva的构建和诱导表达 | 第71-74页 |
| 3.4 启动子的改造 | 第74-83页 |
| 3.4.1 启动子BSP3和启动子P43核心区域的杂交及表达 | 第74-78页 |
| 3.4.2 启动子BSP5B启动子核心序列的保守区域突变及表达 | 第78-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-87页 |
| 4.1 麦芽糖α-淀粉酶基因在B.subtilis中的表达 | 第83-84页 |
| 4.2 枯草芽孢杆菌启动子的研究 | 第84-85页 |
| 4.3 枯草芽孢杆菌启动子的改造 | 第85-87页 |
| 第五章 结论与展望 | 第87-89页 |
| 5.1 结论 | 第87-88页 |
| 5.1.1 通过SDS-PAGE法筛选启动子 | 第87页 |
| 5.1.2 不同启动子核心保守区域杂交对sva基因表达的影响 | 第87页 |
| 5.1.3 启动子的核心保守区域的定点突变对SVA基因表达的影响 | 第87-88页 |
| 5.2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 附录一 | 第98-101页 |
| 附录二 | 第101-103页 |
| 附录三 | 第103-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文目录 | 第108页 |
