| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-17页 |
| 1.1 胃癌研究进展 | 第13页 |
| 1.2 贝壳杉烷型二萜类化合物 | 第13-14页 |
| 1.3 p53 | 第14-15页 |
| 1.4 EMT相关蛋白 | 第15页 |
| 1.5 本课题研究的内容 | 第15-17页 |
| 第二章 贝壳杉烷型二萜类衍生物DN3诱导胃癌细胞凋亡及机制研究 | 第17-41页 |
| 引言 | 第17页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第17-23页 |
| 2.1.1 试验细胞株 | 第17-18页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 相关试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 细胞增殖抑制试验 | 第24-25页 |
| 2.2.3 细胞核染色 | 第25页 |
| 2.2.4 流式细胞术分析细胞凋亡 | 第25页 |
| 2.2.5 流式细胞术分析细胞膜电位 | 第25-26页 |
| 2.2.6 胞内ATP含量的检测 | 第26页 |
| 2.2.7 Westernblot | 第26-31页 |
| 2.2.7.1 提取细胞总蛋白 | 第27页 |
| 2.2.7.2 提取细胞线粒体蛋白 | 第27-28页 |
| 2.2.7.3 BCA蛋白定量法 | 第28-29页 |
| 2.2.7.4 蛋白变性 | 第29页 |
| 2.2.7.5 SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.7.6 转膜 | 第30-31页 |
| 2.2.7.7 丽春红染色 | 第31页 |
| 2.2.7.8 特异性结合 | 第31页 |
| 2.2.7.9 化学发光与曝光 | 第31页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-38页 |
| 2.3.1 细胞增殖抑制试验筛选出敏感细胞株 | 第32-33页 |
| 2.3.2 对所筛选的细胞株进行DAPI染色 | 第33页 |
| 2.3.3 流式细胞术分析细胞凋亡试验结果 | 第33-34页 |
| 2.3.4 DN3显著降低胃癌细胞株线粒体膜电位 | 第34-35页 |
| 2.3.5 化合物DN3可以降低胃癌细胞中ATP的含量 | 第35-36页 |
| 2.3.6 化合物DN3对线粒体凋亡通路蛋白的调节作用 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 贝壳杉烷型二萜类衍生物DN3对胃癌细胞克隆形成及迁移的影响 | 第41-50页 |
| 引言 | 第41页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第41-43页 |
| 3.1.1 实验细胞株 | 第41-42页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 3.1.4 相关试剂配制 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.2.1 克隆形成试验 | 第43页 |
| 3.2.2 划痕-愈合试验 | 第43页 |
| 3.2.3 Transwell试验检测细胞迁移 | 第43-44页 |
| 3.2.4 Westernblotting | 第44页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 DN3对胃癌细胞单克隆形成的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.2 DN3对肿瘤细胞划痕-愈合试验的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.3 DN3对肿瘤细胞迁移能力的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 DN3对肿瘤细胞EMT关键蛋白的调控 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 DN3通过增加ROS诱导胃癌细胞凋亡 | 第50-58页 |
| 引言 | 第50页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.1 实验细胞株 | 第50页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.3 相关试剂配制 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.2.1 NAC预孵育后DN3刺激细胞毒试验 | 第51页 |
| 4.2.2 NAC预孵育后DN3作用后,细胞内ROS的变化 | 第51页 |
| 4.2.3 NAC预孵育后DN3诱导细胞凋亡试验 | 第51-52页 |
| 4.2.4 NAC预孵育后DN3对细胞线粒体膜电位的影响 | 第52页 |
| 4.2.5 NAC预孵育后Westernblot检测DN3对线粒体膜上的蛋白影响 | 第52页 |
| 4.2.6 统计学分析 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-57页 |
| 4.3.1 NAC预孵育后能明显逆转DN3的细胞毒性 | 第52-53页 |
| 4.3.2 NAC逆转DN3诱导的ROS产生 | 第53-54页 |
| 4.3.3 NAC阻断DN3诱导的细胞凋亡 | 第54-55页 |
| 4.3.4 NAC逆转DN3对线粒体膜电位的作用 | 第55-56页 |
| 4.3.5 NAC阻断DN3的蛋白调控作用 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57页 |
| 小结 | 第57-58页 |
| References | 第58-65页 |
| 个人简历 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
