| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 肿瘤转移的机制 | 第12-13页 |
| 1.2 融合基因 | 第13-16页 |
| 1.2.1 融合方式 | 第13-15页 |
| 1.2.2 融合基因的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3 融合基因与肿瘤 | 第16-17页 |
| 1.4 前期工作 | 第17-19页 |
| 1.5 本课题主要目的及研究意义 | 第19-22页 |
| 1.5.1 鉴定肿瘤转移中的GOLT1A-Kiss1特异性基因融合事件 | 第20页 |
| 1.5.2 对GOLT1A-Kiss1融合基因的具体功能进行分析 | 第20-21页 |
| 1.5.3 对GOLT1A-Kiss1基因融合事件进行病理分析 | 第21-22页 |
| 第2章 GOLT1A-Kiss1融合基因的鉴定及测序 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试剂和耗材 | 第23页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 ACC-2和ACC-M两种细胞株的cDNA提取与制备 | 第24-27页 |
| 2.2.2 ACC-M中的特异性融合基因GOLT1A-Kiss1的鉴定及测序 | 第27-31页 |
| 2.2.3 GOLT1A-Kiss1融合基因的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.4 GOLT1A-Kiss1融合基因的全长cDNA的获取 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第34-36页 |
| 2.3.1 融合基因的鉴定及测序 | 第34-35页 |
| 2.3.2 融合基因融合方式的鉴定及测序 | 第35-36页 |
| 2.4 小结 | 第36-37页 |
| 第3章 ACC-2和ACC-M细胞系中Kiss1基因及表达载体的鉴定 | 第37-49页 |
| 3.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第37页 |
| 3.1.3 试剂和耗材 | 第37-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 目的基因的克隆 | 第39-42页 |
| 3.2.2 Kiss1基因表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.3 Westernblot | 第43-45页 |
| 3.2.4 ELISA | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第46-48页 |
| 3.3.1 Kiss1基因的扩增 | 第46页 |
| 3.3.2 表达载体的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 Western检测内源性KISS1蛋白的表达 | 第47页 |
| 3.3.4 ELISA检测溶液中KISS1蛋白的水平 | 第47-48页 |
| 3.4 小结 | 第48-49页 |
| 第4章 融合基因与Kiss1基因间的生物功能分析 | 第49-56页 |
| 4.1 材料 | 第49页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第49页 |
| 4.1.3 试剂和耗材 | 第49页 |
| 4.1.4 常用试剂的配制 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 目的基因的克隆 | 第49-51页 |
| 4.2.2 磷酸钙转染法 | 第51-52页 |
| 4.2.3 Westernblot | 第52页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第52-55页 |
| 4.3.1 Fusion-GFP基因的扩增 | 第52页 |
| 4.3.2 Fusion-GFP及KISS1-GFP表达载体的鉴定 | 第52-53页 |
| 4.3.3 Fusion-GFP及KISS1-GFP的mRNA水平的表达 | 第53-54页 |
| 4.3.4 Fusion-GFP及KISS1-GFP的蛋白表达 | 第54-55页 |
| 4.4 小结 | 第55-56页 |
| 第5章 融合基因的5’UTR区抑制KISS1蛋白的表达 | 第56-66页 |
| 5.1 材料 | 第56页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第56页 |
| 5.1.3 试剂和耗材 | 第56页 |
| 5.1.4 常用试剂的配制 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 5.2.1 目的基因的克隆 | 第56-57页 |
| 5.2.2 表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 5.2.3 融合基因中Kiss1上游的ATG的突变 | 第58-59页 |
| 5.2.4 脂质体转染 | 第59-60页 |
| 5.2.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第60-61页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第61-65页 |
| 5.3.1 目的基因的扩增 | 第61-62页 |
| 5.3.2 突变后表达载体的鉴定 | 第62页 |
| 5.3.3 Westernblot | 第62-63页 |
| 5.3.4 5 ’UTR区抑制Kiss1基因的表达 | 第63-64页 |
| 5.3.5 融合基因特异性存在于高转移细胞系 | 第64-65页 |
| 5.4 小结 | 第65-66页 |
| 第6章 总结与展望 | 第66-69页 |
| 6.1 本文工作总结 | 第66-67页 |
| 6.2 未来工作展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与科研成果 | 第75页 |
