| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 MIRNA的概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 miRNA的概念及特征 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNA的发现 | 第12-13页 |
| 1.1.3 miRNA的生物合成 | 第13-14页 |
| 1.1.4 miRNA的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.1.5 miRNA的特异性 | 第15页 |
| 1.2 MIRNA的研究方法 | 第15-20页 |
| 1.2.1 正向遗传学法 | 第15-16页 |
| 1.2.2 直接克隆法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 生物信息学法 | 第17-19页 |
| 1.2.4 Northern杂交 | 第19页 |
| 1.2.5 原位杂交 | 第19页 |
| 1.2.6 基因芯片 | 第19-20页 |
| 1.2.7 荧光定量PCR(real-time quantitation PCR,RT-qPCR) | 第20页 |
| 1.2.8 高通量测序 | 第20页 |
| 1.3 结语 | 第20-22页 |
| 第二章 SOLEXA高通量测序检测卵中MIRNA及其生物信息学分析 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 长角血蜱卵中Total RNA的提取与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.2 样品小RNA文库的建立 | 第24-25页 |
| 2.2.3 高通量测序流程 | 第25-26页 |
| 2.2.4 小RNA高通量测序后的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.5 荧光定量RT-qPCR验证 | 第27-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-35页 |
| 2.3.1 miRNA的分离与鉴定 | 第29页 |
| 2.3.2 Solex测序结果生物信息学分析 | 第29-32页 |
| 2.3.3 保守miRNAs的碱基偏向性 | 第32页 |
| 2.3.4 新miRNAs的分析 | 第32-34页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR对数据库的验证结果 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 SYBR GREEN I实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第38-47页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第38页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 实验仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.4 miRNAs的引物序列 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 样品的准备 | 第39页 |
| 3.2.2 Total RNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.3 Total RNAs纯度及浓度的鉴定 | 第39页 |
| 3.2.4 变性胶电泳检测 | 第39页 |
| 3.2.5 miRNA的反转录 | 第39页 |
| 3.2.6 Stem-loop RT-qPCR实验 | 第39-40页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR标准曲线的建立及可靠性检验 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-45页 |
| 3.3.1 miRNA的分离与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 miR-184、miR-275、β-actin基因的普通PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR标准曲线及扩增曲线的建立 | 第42-43页 |
| 3.3.4 溶解曲线分析 | 第43-44页 |
| 3.3.5 重复性检验 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 长角血蜱中MIR-184和MIR-275基因的表达分析 | 第47-52页 |
| 4.1 实验动物及样品收集 | 第47页 |
| 4.2 方法 | 第47页 |
| 4.2.1 Total RNAs的提取 | 第47页 |
| 4.2.2 miR-184和miR-275表达丰度的检测 | 第47页 |
| 4.2.3 数据的分析和处理 | 第47页 |
| 4.3 结果 | 第47-50页 |
| 4.3.1 miR-184的表达情况 | 第47-49页 |
| 4.3.2 miR-275的表达情况 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
