| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 中英文缩略词表 | 第24-26页 |
| 引言 | 第26-29页 |
| 第一部分 染尘巨噬细胞外泌体提取、鉴定及其对肺成纤维细胞转分化影响观察 | 第29-67页 |
| 1 实验材料与方法 | 第31-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第31-36页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第31页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第31-33页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第33-36页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第36-38页 |
| 1.3 实验方法 | 第38-49页 |
| 1.3.1 SiO_2粉尘刺激对巨噬细胞形态改变的光学显微镜观察 | 第38-39页 |
| 1.3.2 CCK8试剂盒检测系列浓度SiO_2粉尘刺激的巨噬细胞活性 | 第39页 |
| 1.3.3 外泌体的提取和鉴定 | 第39-44页 |
| 1.3.4 原代肺成纤维细胞的提取与纯化 | 第44-45页 |
| 1.3.5 肺成纤维细胞的传代与形态学观察 | 第45页 |
| 1.3.6 流式细胞术检测肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化 | 第45页 |
| 1.3.7 各代肺成纤维细胞α-SMA表达水平免疫荧光显微镜观察 | 第45-46页 |
| 1.3.8 激光共聚焦显微镜观察原代肺成纤维细胞对外泌体的摄取 | 第46-47页 |
| 1.3.9 各代肺成纤维细胞转分化相关蛋白免疫组织化学检测 | 第47-48页 |
| 1.3.10 统计方法 | 第48-49页 |
| 2 本部分技术路线图 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-61页 |
| 3.1 SiO_2粉尘刺激对巨噬细胞活性及形态的影响 | 第50-51页 |
| 3.1.1 SiO_2粉尘刺激对巨噬细胞的毒性试验 | 第50-51页 |
| 3.1.2 SiO_2粉尘刺激对巨噬细胞形态的影响 | 第51页 |
| 3.2 外泌体的提取、纯化、鉴定及粉尘刺激对其分泌水平的影响 | 第51-54页 |
| 3.2.1 不同方法提取外泌体效果比较 | 第51页 |
| 3.2.2 透射电子显微镜成像 | 第51-52页 |
| 3.2.3 NTA外泌体粒径分析 | 第52-53页 |
| 3.2.4 外泌体表面标志蛋白检测 | 第53页 |
| 3.2.5 外泌体总蛋白水平检测 | 第53-54页 |
| 3.3 肺成纤维细胞的原代提取和细胞传代对其转分化的影响 | 第54-58页 |
| 3.3.1 肺成纤维细胞的原代提取与纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.2 传代对肺成纤维细胞形态学的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.3 P1-P4代肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化水平检测 | 第56-57页 |
| 3.3.4 P1-P4代肺成纤维细胞α-SMA表达水平检测 | 第57-58页 |
| 3.4 染尘巨噬细胞外泌体对肺成纤维细胞转分化的影响 | 第58-61页 |
| 3.4.1 肺成纤维细胞摄取外泌体观察 | 第58-59页 |
| 3.4.2 巨噬细胞外泌体诱导肺成纤维细胞转分化能力探索 | 第59页 |
| 3.4.3 外泌体诱导肺成纤维细胞转分化相关蛋白表达水平检测 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| 4.1 改良超滤离心法可获取高纯度外泌体 | 第62-64页 |
| 4.2 原代肺成纤维细胞转分化率随传代次数增加升高 | 第64页 |
| 4.3 摄取染尘巨噬细胞外泌体后肺成纤维细胞转分化率增加 | 第64-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 第二部分 尘肺相关巨噬细胞外泌体miRNAs筛选和生物信息学功能预测 | 第67-90页 |
| 1 实验材料与方法 | 第69-78页 |
| 1.1 实验材料 | 第69-71页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第69页 |
| 1.1.2 调查现场 | 第69页 |
| 1.1.3 主要实验试剂 | 第69-70页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第70-71页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第71-72页 |
| 1.3 实验方法 | 第72-78页 |
| 1.3.1 尘肺病患者和健康对照血清制备 | 第72页 |
| 1.3.2 人群血清外泌体分离、鉴定 | 第72-73页 |
| 1.3.3 外泌体RNA抽提 | 第73页 |
| 1.3.4 RNA定量 | 第73-74页 |
| 1.3.5 RNA质检 | 第74页 |
| 1.3.6 miRNAs文库构建 | 第74-75页 |
| 1.3.7 簇生成 | 第75-76页 |
| 1.3.8 IlluminaHiseq2500测序 | 第76页 |
| 1.3.9 数据库序列比对 | 第76页 |
| 1.3.10 差异miRNAs筛选 | 第76页 |
| 1.3.11 保守miRNAs比对 | 第76-77页 |
| 1.3.12 miRNAs靶基因预测 | 第77页 |
| 1.3.13 miRNAs功能注释 | 第77页 |
| 1.3.14 统计学分析 | 第77-78页 |
| 2 本部分实验技术路线图 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-87页 |
| 3.1 尘肺病患者及健康对照一般情况 | 第79页 |
| 3.2 尘肺病相关巨噬细胞外泌体miRNAs质量控制 | 第79-80页 |
| 3.3 尘肺病相关巨噬细胞外泌体差异表达miRNAs筛选 | 第80页 |
| 3.4 人源、鼠源差异表达高保守miRNAs序列比对 | 第80-81页 |
| 3.5 尘肺病相关差异表达高保守miRNAs筛选 | 第81-82页 |
| 3.6 尘肺病相关巨噬细胞外泌体miRNAs靶基因预测 | 第82-83页 |
| 3.7 尘肺病相关巨噬细胞外泌体miRNAs功能注释 | 第83-84页 |
| 3.8 肺成纤维细胞分化相关miRNAs、靶基因及信号通路预测 | 第84-87页 |
| 4 讨论 | 第87-89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 第三部分 miR-107-3p对肺成纤维细胞转分化的作用和机制 | 第90-117页 |
| 1 实验材料与方法 | 第92-107页 |
| 1.1 实验材料 | 第92-97页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第92页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第92-94页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第94-97页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第97-99页 |
| 1.3 实验方法 | 第99-107页 |
| 1.3.1 染尘巨噬细胞外泌体的提取 | 第99页 |
| 1.3.2 透射电子显微镜鉴定观察外泌体形态 | 第99-100页 |
| 1.3.3 原代肺成纤维细胞的提取与纯化 | 第100-101页 |
| 1.3.4 肺成纤维细胞的传代与干预 | 第101页 |
| 1.3.5 CCK8试剂盒检测不同干预组肺成纤维细胞活性 | 第101页 |
| 1.3.6 各干预组肺成纤维细胞α-SMA表达水平免疫荧光显微镜观察 | 第101-102页 |
| 1.3.7 各干预组肺成纤维细胞α-SMA表达水平免疫组织化学检测 | 第102-103页 |
| 1.3.8 流式细胞术检测肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化比例 | 第103-104页 |
| 1.3.9 免疫印迹法检测各干预组肺成纤维细胞转分化相关蛋白 | 第104-106页 |
| 1.3.10 统计方法 | 第106-107页 |
| 2 本部分实验技术线路图 | 第107-108页 |
| 3 结果 | 第108-113页 |
| 3.1 不同干预处理对肺成纤维细胞形态的影响 | 第108-109页 |
| 3.2 不同干预处理对肺成纤维细胞活性的影响 | 第109页 |
| 3.3 肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化鉴定 | 第109-111页 |
| 3.3.1 免疫荧光法定性检测各干预组肺成纤维细胞α-SMA水平 | 第109页 |
| 3.3.2 免疫组织化学法定量检测各干预组α-SMA水平 | 第109-110页 |
| 3.3.3 流式细胞术检测各干预组肺成纤维细胞表型 | 第110-111页 |
| 3.4 miR-107-3p调控的TGF-β信号通路相关蛋白表达水平检测 | 第111-113页 |
| 4 讨论 | 第113-116页 |
| 4.1 不同干预处理对肺成纤维细胞活性及形态的影响 | 第113页 |
| 4.2 不同干预处理对肺成纤维细胞表型转分化的影响 | 第113-114页 |
| 4.3 染尘巨噬细胞外泌体诱导肺成纤维细胞表型转分化机制探索 | 第114-116页 |
| 5 小结 | 第116-117页 |
| 结论 | 第117-118页 |
| 本研究的局限性 | 第118页 |
| 下一步的研究计划 | 第118页 |
| 论文创新点 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 综述 外泌体miRNAs介导的细胞间通讯研究进展 | 第127-154页 |
| 1.外泌体研究现状 | 第128-134页 |
| 2.外泌体miRNAs的生物学功能及作用机制 | 第134-139页 |
| 3.外泌体miRNAs在不同疾病中的作用 | 第139-143页 |
| 4.展望 | 第143-145页 |
| 参考文献 | 第145-154页 |
| 个人简历 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
