| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| 1.1 萤火虫及荧光素酶的简介 | 第8-10页 |
| 1.1.1 萤火虫的生物学特性 | 第8页 |
| 1.1.2 荧光素酶的基本特性 | 第8-9页 |
| 1.1.3 荧光素酶的研究历史 | 第9-10页 |
| 1.2 萤火虫发光原理和荧光素酶的稳定性 | 第10-13页 |
| 1.2.1 萤火虫的发光原理 | 第11页 |
| 1.2.2 荧光素酶的稳定性 | 第11-13页 |
| 1.3 荧光素酶的应用及研究现状 | 第13-15页 |
| 1.3.1 荧光素酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 国内外研究现状及应用前景 | 第15页 |
| 1.4 基因工程重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第15-16页 |
| 1.4.1 表达载体的选择 | 第16页 |
| 1.4.2 pET28a 的表达系统 | 第16页 |
| 1.5 蛋白质的分离纯化 | 第16-20页 |
| 1.5.1 亲和层析 | 第17-19页 |
| 1.5.2 离子交换层析 | 第19-20页 |
| 1.6 本文研究的主要内容 | 第20-21页 |
| 第二章 重组荧光素酶高效表达载体的构建及诱导表达 | 第21-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.2 目的基因的获取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 重组载体pET28a-Luc 构建 | 第25-29页 |
| 2.2.4 重组子阳性克隆的筛选和鉴定 | 第29页 |
| 2.3 荧光素酶的诱导表达 | 第29-31页 |
| 2.3.1 基因工程菌生长曲线的测定 | 第29页 |
| 2.3.2 荧光素酶的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.3.3 表达产物的SDS—PAGE 电泳鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 荧光素酶诱导表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.1 诱导时机对荧光素酶产量的影响 | 第31页 |
| 2.4.2 诱导温度对目的蛋白产量的影响 | 第31页 |
| 2.4.3 诱导剂IPTG 浓度对目的蛋白产量的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.4 诱导时间的长短对荧光素酶产量的影响 | 第32页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第32-41页 |
| 2.5.1 pET28a—luc 重组载体的构建 | 第32-36页 |
| 2.5.2 荧光素酶的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.5.3 荧光素酶表达条件的优化 | 第37-41页 |
| 第三章 重组荧光素酶的分离纯化 | 第41-51页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第42页 |
| 3.2 基因工程菌的传代培养 | 第42-43页 |
| 3.3 基因工程菌在发酵罐中发酵 | 第43页 |
| 3.4 基因工程菌的超声波破碎和上清的收集 | 第43-44页 |
| 3.5 光素酶的分离纯化 | 第44-47页 |
| 3.5.1 菌上清的酶活检测 | 第44页 |
| 3.5.2 阴离子交换法对目标蛋白的初步纯化 | 第44-45页 |
| 3.5.3 应用亲和层析对荧光素酶的再次纯化 | 第45页 |
| 3.5.4 透析除盐 | 第45-46页 |
| 3.5.5 对纯化后的荧光素酶进行收率测定 | 第46-47页 |
| 3.6 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 第四章 重组荧光素酶的稳定性研究及保护剂的开发 | 第51-60页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第51页 |
| 4.2 荧光素酶催化发光的基本性质研究 | 第51-52页 |
| 4.2.1 ATP 标准曲线的制作和仪器检测极限的确定 | 第51-52页 |
| 4.2.2 不同荧光素的浓度对发光强度的影响 | 第52页 |
| 4.2.3 不同M92+浓度对发光强度的影响 | 第52页 |
| 4.3 荧光素酶稳定性的研究 | 第52-53页 |
| 4.3.1 温度对荧光素酶活性的影响 | 第53页 |
| 4.3.2 PH 对荧光素酶活性的影响 | 第53页 |
| 4.4 几种保护剂对荧光素酶活性的保护作用的研究 | 第53-54页 |
| 4.4.1 甘油对荧光素酶活性的保护作用 | 第53页 |
| 4.4.2 蔗糖对荧光素酶活性的保护作用 | 第53页 |
| 4.4.3 几种巯基保护剂对荧光素酶活性的保护作用 | 第53-54页 |
| 4.4.4 BSA 对荧光素酶活性的保护作用 | 第54页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第54-60页 |
| 第五章 重组荧光素的酶产品应用 | 第60-63页 |
| 5.1 荧光素酶应用于食品药品等病原微生物含量的快速检测 | 第60页 |
| 5.2 快速检测装置的设计 | 第60-62页 |
| 5.3 破菌液的研究 | 第62-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 6.1 结论 | 第63-64页 |
| 6.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
