| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略语索引 | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 概述 | 第11页 |
| 1.2 志贺氏菌的生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.2.1 菌落形态与培养特性 | 第11-12页 |
| 1.2.2 志贺氏菌分类 | 第12页 |
| 1.3 志贺氏菌的检测方法 | 第12-16页 |
| 1.3.1 传统检测方法 | 第12页 |
| 1.3.2 分子生物学检测方法 | 第12-14页 |
| 1.3.3 免疫学检测方法 | 第14-16页 |
| 1.4 基因工程抗体 | 第16-19页 |
| 1.4.1 小分子抗体 | 第16-18页 |
| 1.4.2 人源化抗体 | 第18-19页 |
| 1.5 展望 | 第19-20页 |
| 第二章 抗志贺氏菌多克隆抗体的制备 | 第20-27页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 2.1 前言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21页 |
| 2.2.1 实验菌株、免疫动物 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第21页 |
| 2.2.3 相关试剂及培养基的配制 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.3.1 志贺氏菌全菌抗原制备 | 第21-22页 |
| 2.3.2 其它菌株包被原的制备 | 第22页 |
| 2.3.3 动物免疫方案 | 第22页 |
| 2.3.4 抗血清效价及特异性检测 | 第22-23页 |
| 2.3.5 抗血清的纯化及检测 | 第23-24页 |
| 2.4 实验结果 | 第24-26页 |
| 2.4.1 志贺氏菌兔多抗血清效价测定结果 | 第24页 |
| 2.4.2 多抗血清纯化前后的特异性检测 | 第24-25页 |
| 2.4.3 纯化前后多抗血清的电泳检测 | 第25-26页 |
| 2.5 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 抗志贺氏菌单克隆抗体的制备 | 第27-37页 |
| 摘要 | 第27页 |
| 3.1 前言 | 第27-28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第28页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第28页 |
| 3.2.3 相关试剂及培养基的配制 | 第28页 |
| 3.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 3.3.1 免疫原的制备及动物免疫方案 | 第28-29页 |
| 3.3.2 抗血清效价及特异性检测 | 第29页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的融合及筛选 | 第29-30页 |
| 3.3.4 单抗腹水的制备、纯化及检测 | 第30-32页 |
| 3.4 实验结果 | 第32-36页 |
| 3.4.1 小鼠多抗血清效价测定 | 第32页 |
| 3.4.2 单抗腹水的纯化及检测 | 第32-34页 |
| 3.4.3 抗体所识别的抗原的检测及鉴定 | 第34-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 志贺氏菌胶体金免疫试纸条方法的建立 | 第37-46页 |
| 摘要 | 第37页 |
| 4.1 前言 | 第37-38页 |
| 4.2 实验材料 | 第38页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第38页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第38页 |
| 4.2.3 相关试剂及培养基的配制 | 第38页 |
| 4.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 4.3.1 单克隆抗体与多克隆抗体的配对 | 第38页 |
| 4.3.2 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第38-40页 |
| 4.3.3 胶体金免疫试纸条的评价 | 第40-41页 |
| 4.4 实验结果 | 第41-45页 |
| 4.4.1 多克隆抗体和单克隆抗体ELISA配对结果 | 第41页 |
| 4.4.2 胶体金标记抗体的最佳pH值与T线包被浓度的确定 | 第41-42页 |
| 4.4.3 试纸条特异性检测 | 第42-43页 |
| 4.4.4 胶体金试纸条灵敏度分析 | 第43-45页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 志贺氏菌单抗轻、重链可变区基因的克隆、表达和活性验证 | 第46-65页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 5.1 前言 | 第46-47页 |
| 5.2 实验材料 | 第47页 |
| 5.2.1 实验菌株及质粒 | 第47页 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第47页 |
| 5.2.3 相关试剂及培养基的配制 | 第47页 |
| 5.3 实验方法 | 第47-57页 |
| 5.3.1 志贺氏菌单抗轻、重链可变区的T载体克隆以及序列测定 | 第47-52页 |
| 5.3.2 志贺氏菌单抗重链可变区基因的克隆 | 第52-54页 |
| 5.3.3 志贺氏菌单抗重链可变区蛋白的表达 | 第54-56页 |
| 5.3.4 直接ELISA法检测pV_H-ET、pV_H-G4表达产物活性 | 第56-57页 |
| 5.4 实验结果 | 第57-63页 |
| 5.4.1 志贺氏菌单抗细胞总RNA的提取 | 第57页 |
| 5.4.2 V_L、V_H基因的PCR扩增结果 | 第57-58页 |
| 5.4.3 T载体阳性克隆子的验证 | 第58-59页 |
| 5.4.4 V_L、V_H基因序列比对结果与分析 | 第59页 |
| 5.4.5 PCR扩增与双酶切验证阳性克隆子 | 第59-60页 |
| 5.4.6 V_H蛋白表达的验证 | 第60-62页 |
| 5.4.7 ELISA法检测V_H蛋白的活性 | 第62-63页 |
| 5.5 分析与讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 结论 | 第65-66页 |
| 6.1.1 抗志贺氏菌多克隆抗体的制备 | 第65页 |
| 6.1.2 抗志贺氏菌单克隆抗体的制备 | 第65页 |
| 6.1.3 胶体金免疫层析试纸条方法的建立 | 第65-66页 |
| 6.1.4 志贺氏菌单抗轻、重链可变区基因的克隆、表达和活性验证 | 第66页 |
| 6.2 展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录A 实验菌株 | 第73-75页 |
| 附录B 实验试剂 | 第75-77页 |
| 附录C 实验仪器设备 | 第77-78页 |
| 附录D 常用试剂的配制 | 第78-79页 |
| 附录E 培养基的配制 | 第79-80页 |
| 附录F Omp A from Shigella基因序列 | 第80-81页 |
| 附录G 志贺氏菌轻链可变区基因序列 | 第81-82页 |
| 附录H 志贺氏菌重链可变区基因序列 | 第82-83页 |
| 个人介绍 | 第83页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第83页 |
