不同同源臂长载体对水稻Bel基因打靶效率的影响
| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-22页 |
| 1.1 基因打靶技术的原理及机制 | 第7-11页 |
| 1.1.1 Holliday模型 | 第8页 |
| 1.1.2 Meselson-Radding模型 | 第8-9页 |
| 1.1.3 链断裂修复模型 | 第9-10页 |
| 1.1.4 单链退火模型 | 第10-11页 |
| 1.2 基因打靶效率的影响因素 | 第11-14页 |
| 1.2.1 打靶载体类型的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.2 打靶载体同源序列的长度及比例的影响 | 第12页 |
| 1.2.3 正负选择标记的影响 | 第12-13页 |
| 1.2.4 靶基因拷贝数的影响 | 第13页 |
| 1.2.5 转化受体的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 基因打靶技术在植物领域的研究 | 第14-18页 |
| 1.3.1 在拟南芥中的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 在苔藓中的研究 | 第15-16页 |
| 1.3.3 在水稻中的研究 | 第16-18页 |
| 1.4 水稻Bel的研究 | 第18-21页 |
| 1.4.1 水稻苯达松敏感致死突变体的获得 | 第18-19页 |
| 1.4.2 Bel的基因定位分析 | 第19-20页 |
| 1.4.3 bel在水稻杂交育种中的应用价值 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的基础、目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验主要载体和菌株 | 第22-23页 |
| 2.2 实验主要仪器与试剂 | 第23页 |
| 2.3 水稻培养基和农杆菌培养基 | 第23-24页 |
| 2.4 水稻转基因主要流程 | 第24-26页 |
| 2.4.1 水稻愈伤组织的诱导 | 第24-25页 |
| 2.4.2 水稻愈伤组织的继代 | 第25页 |
| 2.4.3 水稻愈伤组织的预培养 | 第25页 |
| 2.4.4 农杆菌的活化培养 | 第25页 |
| 2.4.5 水稻愈伤组织与农杆菌共培养 | 第25页 |
| 2.4.6 水稻愈伤组织的筛选 | 第25-26页 |
| 2.4.7 抗性愈伤的预分化 | 第26页 |
| 2.4.8 抗性愈伤的分化 | 第26页 |
| 2.4.9 转化苗的生根及移栽 | 第26页 |
| 2.5 转化植株的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.5.1 水稻叶片基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.5.2 转化植株的潮霉素抗性PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.5.3 潮霉素抗性植株的中靶PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.6 转化频率的计算 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-34页 |
| 3.1 农杆菌介导的pRB2、pRB4打靶实验 | 第29-30页 |
| 3.2 转化植株的PCR检测 | 第30-32页 |
| 3.2.1 转化植株的潮霉素抗性PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.2 中靶植株的PCR检测 | 第31-32页 |
| 3.3 两种打靶载体转化率、分化率的比较 | 第32-34页 |
| 第四章 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1 水稻愈伤组织的状态对实验的影响 | 第34-35页 |
| 4.2 不同同源臂长对愈伤的转化率、分化率的影响 | 第35-36页 |
| 附 缩略词表 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
