| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-20页 |
| 1.1 羊草的研究概况 | 第9-10页 |
| 1.1.1 羊草的地理分布 | 第9页 |
| 1.1.2 羊草的生物学特性 | 第9-10页 |
| 1.2 植物抗盐碱的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 土地盐碱化问题 | 第10页 |
| 1.2.2 盐碱胁迫对植物生长的影响 | 第10-11页 |
| 1.2.3 植物的抗逆性研究 | 第11页 |
| 1.2.4 羊草抗盐碱胁迫的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 分子生物学技术在抗逆植物中的应用 | 第12-14页 |
| 1.3.1 盐碱胁迫蛋白及相关基因 | 第12-14页 |
| 1.4 真核生物翻译起始因子eIF基因家族研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4.1 蛋白质翻译的过程 | 第14-15页 |
| 1.4.2 真核翻译起始因子 | 第15-17页 |
| 1.5 目前对羊草的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.6 本课题研究的研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 羊草eIF1基因片段的克隆 | 第20-39页 |
| 2.1 试验材料与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.1 供试植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 供试菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法和步骤 | 第22-31页 |
| 2.2.1 羊草总RNA提取的预准备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 Trizol提取羊草总RNA | 第23页 |
| 2.2.3 总RNA的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.4 反转录合成cDNA | 第24页 |
| 2.2.5 设计引物 | 第24-25页 |
| 2.2.6 羊草eIF1基因的RT-PCR | 第25页 |
| 2.2.7 PCR产物的回收 | 第25-26页 |
| 2.2.8 回收产物与载体连接 | 第26页 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.10 转化 | 第27页 |
| 2.2.11 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.12 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.13 测序及序列分析 | 第29页 |
| 2.2.14 通过半定量RT-PCR分析胁迫处理后羊草eIF1基因的表达特性 | 第29-31页 |
| 2.2.14.1 18S rRNA的引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.14.2 羊草胁迫处理 | 第30页 |
| 2.2.14.3 半定量RT-PCR分析羊草胁迫处理后的表达特性 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.3.1 总RNA电泳及浓度检测 | 第31页 |
| 2.3.2 目的片段的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.3 PCR鉴定阳性菌落 | 第32页 |
| 2.3.4 eIF1基因生物信息学分析 | 第32-36页 |
| 2.3.4.1 测序结果分析 | 第32-33页 |
| 2.3.4.2 氨基酸的分析 | 第33-35页 |
| 2.3.4.3 羊草LceIF1多重序列比较及系统发育分析 | 第35-36页 |
| 2.3.5 克隆基因的表达特性分析 | 第36-39页 |
| 2.3.5.1 LceIF1基因在羊草各组织的表达分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5.2 LceIF1基因干旱胁迫下表达差异分析 | 第37页 |
| 2.3.5.3 LceIF1基因在盐胁迫下表达差异分析 | 第37-38页 |
| 2.3.5.4 LceIF1基因在ABA胁迫下表达差异分析 | 第38-39页 |
| 第三章 LceIF1基因的酵母转化及抗盐性分析 | 第39-47页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 | 第39页 |
| 3.1.3 培养基 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1 引物的合成 | 第40页 |
| 3.2.2 目的片段的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.3 双酶切反应 | 第41页 |
| 3.2.4 连接反应 | 第41-42页 |
| 3.2.5 感受态细胞的制备、转化和提取 | 第42页 |
| 3.2.6 转化反应 | 第42-43页 |
| 3.2.7 酵母重组质粒pYES2-LceIF1的检测 | 第43页 |
| 3.2.8 酵母SY2805(pYES2-LceIF1)逆境胁迫试验 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-47页 |
| 3.3.1 目的基因的PCR扩增及酶切 | 第43-44页 |
| 3.3.2 PCR产物和质粒表达载体pYES2的酶切反应 | 第44-45页 |
| 3.3.3 酵母重组质粒pYES2-LceIF1的PCR检测 | 第45页 |
| 3.3.4 在盐胁迫下重组酵母SY2805(pYES2-LceIF1)的表达 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
