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猪圆环病毒2型抗原和抗体胶体金检测方法的建立

摘要第6-9页
Abstract第9-11页
符号说明第12-14页
第一部分 文献综述第14-28页
    1 猪圆环病毒概述第14-18页
        1.1 病毒的发现与分类第14-15页
        1.2 病毒的基因组结构第15页
        1.3 编码蛋白第15-17页
        1.4 PCV2 的流行病学第17-18页
        1.5 PCV2 疫苗研制第18页
    2 PCV2 病原学检测技术第18-20页
        2.1 电镜检测第18-19页
        2.2 原位杂交技术(ISH)第19页
        2.3 免疫组化试验(IHC)第19页
        2.4 环介导恒温扩增技术(LAMP)第19-20页
        2.5 聚合酶链反应技术(PCR)第20页
    3 PCV2 血清学检测技术第20-28页
        3.1 间接免疫荧光技术(IFA)第20-21页
        3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)第21页
        3.3 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)第21页
        3.4 胶体金免疫层析法(GICA)第21-28页
第二部分 实验研究第28-74页
    第一章 PCV2 抗原胶体金检测方法的建立第28-42页
        试验一 PCV2 单克隆抗体的纯化与鉴定第28-34页
            1 材料与方法第28-32页
                1.1 单克隆抗体第28页
                1.2 实验试剂第28页
                1.3 试剂的配制第28-29页
                1.4 实验仪器第29页
                1.5 小鼠腹水的纯化第29-30页
                1.6 单克隆抗体的Western-blot鉴定第30-32页
            2 结果与分析第32-33页
                2.1 蛋白浓度的测定第32页
                2.2 单抗的Western-blot鉴定第32-33页
            3 讨论第33页
            4 小结第33-34页
        试验二 PCV2 抗原检测免疫层析试纸的制备及评价第34-42页
            1 材料与方法第34-39页
                1.1 单克隆抗体第34页
                1.2 实验试剂第34页
                1.3 试剂的配制第34-35页
                1.4 实验仪器第35页
                1.5 病毒第35页
                1.6 胶体金的制备及质量鉴定第35-36页
                1.7 金标单抗的制备第36-37页
                1.8 金标单抗的点样第37页
                1.9 T线和C线的点样第37页
                1.10 样品垫的处理第37页
                1.11 吸水垫的制备第37页
                1.12 金标单抗与其余单抗的配对第37-38页
                1.13 试纸条的组装第38页
                1.14 试纸条的检测验证第38-39页
            2 结果与分析第39-40页
                2.1 胶体金的质量鉴定第39页
                2.2 试纸条的检测结果第39-40页
            3 讨论第40-41页
            4 小结第41-42页
    第二章 PCV2 抗体胶体金检测方法的建立第42-74页
        试验一 PCV2 Cap蛋白的原核表达与鉴定第42-57页
            1 材料与方法第42-51页
                1.1 载体与菌株第42页
                1.2 实验试剂第42页
                1.3 培养基及试剂的配制第42-44页
                1.4 实验仪器第44页
                1.5 原核表达载体的构建与鉴定第44-49页
                1.6 菌体表达条件的优化第49-50页
                1.7 表达产物的SDS-PAGE鉴定第50页
                1.8 表达产物的可溶性分析第50页
                1.9 Cap蛋白的Western-blot检测第50-51页
                1.10 Cap蛋白的纯化第51页
            2 结果与分析第51-55页
                2.1 ORF2 基因的PCR扩增结果第51-52页
                2.2 双酶切鉴定结果第52页
                2.3 ORF2 基因的鉴定结果第52-53页
                2.4 Cap蛋白诱导表达条件的优化及SDS-PAGE分析第53页
                2.5 表达产物的分析第53-54页
                2.6 Cap蛋白的Western-blot鉴定第54页
                2.7 Cap蛋白的亲和层析纯化第54-55页
            3 讨论第55-56页
            4 小结第56-57页
        试验二 PCV2 抗体检测免疫层析试纸的研制及应用第57-74页
            1 材料与方法第57-64页
                1.1 实验试剂第57页
                1.2 试剂的配制第57页
                1.3 实验仪器第57-58页
                1.4 血清样本第58页
                1.5 胶体金的制备及质量鉴定第58页
                1.6 金标抗原的制备第58-60页
                1.7 金标抗原的点样第60页
                1.8 T线和C线的点样第60-61页
                1.9 样品垫的处理第61页
                1.10 吸水垫的制备第61页
                1.11 试纸的组装第61页
                1.12 试纸条的性能评价第61-63页
                1.13 试纸的临床应用第63-64页
            2 结果与分析第64-72页
                2.1 胶体金的质量鉴定第64页
                2.2 最佳蛋白标记量第64-65页
                2.3 最佳p H标记量第65页
                2.4 试纸的组装第65-66页
                2.5 试纸条的性能评价第66-71页
                2.6 试纸的临床应用第71-72页
            3 讨论第72-73页
                3.1 抗体免疫层析试纸的检测原理第72页
                3.2 Cap蛋白的标记第72-73页
                3.3 抗体检测试纸条的推广与应用第73页
            4 小结第73-74页
结论第74-76页
参考文献第76-82页
致谢第82-84页
硕士期间发表的学术论著第84-86页
参与课题情况第86页

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