| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 猪圆环病毒概述 | 第14-18页 |
| 1.1 病毒的发现与分类 | 第14-15页 |
| 1.2 病毒的基因组结构 | 第15页 |
| 1.3 编码蛋白 | 第15-17页 |
| 1.4 PCV2 的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.5 PCV2 疫苗研制 | 第18页 |
| 2 PCV2 病原学检测技术 | 第18-20页 |
| 2.1 电镜检测 | 第18-19页 |
| 2.2 原位杂交技术(ISH) | 第19页 |
| 2.3 免疫组化试验(IHC) | 第19页 |
| 2.4 环介导恒温扩增技术(LAMP) | 第19-20页 |
| 2.5 聚合酶链反应技术(PCR) | 第20页 |
| 3 PCV2 血清学检测技术 | 第20-28页 |
| 3.1 间接免疫荧光技术(IFA) | 第20-21页 |
| 3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第21页 |
| 3.3 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) | 第21页 |
| 3.4 胶体金免疫层析法(GICA) | 第21-28页 |
| 第二部分 实验研究 | 第28-74页 |
| 第一章 PCV2 抗原胶体金检测方法的建立 | 第28-42页 |
| 试验一 PCV2 单克隆抗体的纯化与鉴定 | 第28-34页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 1.1 单克隆抗体 | 第28页 |
| 1.2 实验试剂 | 第28页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第28-29页 |
| 1.4 实验仪器 | 第29页 |
| 1.5 小鼠腹水的纯化 | 第29-30页 |
| 1.6 单克隆抗体的Western-blot鉴定 | 第30-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-33页 |
| 2.1 蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| 2.2 单抗的Western-blot鉴定 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 试验二 PCV2 抗原检测免疫层析试纸的制备及评价 | 第34-42页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 单克隆抗体 | 第34页 |
| 1.2 实验试剂 | 第34页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第34-35页 |
| 1.4 实验仪器 | 第35页 |
| 1.5 病毒 | 第35页 |
| 1.6 胶体金的制备及质量鉴定 | 第35-36页 |
| 1.7 金标单抗的制备 | 第36-37页 |
| 1.8 金标单抗的点样 | 第37页 |
| 1.9 T线和C线的点样 | 第37页 |
| 1.10 样品垫的处理 | 第37页 |
| 1.11 吸水垫的制备 | 第37页 |
| 1.12 金标单抗与其余单抗的配对 | 第37-38页 |
| 1.13 试纸条的组装 | 第38页 |
| 1.14 试纸条的检测验证 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-40页 |
| 2.1 胶体金的质量鉴定 | 第39页 |
| 2.2 试纸条的检测结果 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 第二章 PCV2 抗体胶体金检测方法的建立 | 第42-74页 |
| 试验一 PCV2 Cap蛋白的原核表达与鉴定 | 第42-57页 |
| 1 材料与方法 | 第42-51页 |
| 1.1 载体与菌株 | 第42页 |
| 1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 1.3 培养基及试剂的配制 | 第42-44页 |
| 1.4 实验仪器 | 第44页 |
| 1.5 原核表达载体的构建与鉴定 | 第44-49页 |
| 1.6 菌体表达条件的优化 | 第49-50页 |
| 1.7 表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第50页 |
| 1.8 表达产物的可溶性分析 | 第50页 |
| 1.9 Cap蛋白的Western-blot检测 | 第50-51页 |
| 1.10 Cap蛋白的纯化 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-55页 |
| 2.1 ORF2 基因的PCR扩增结果 | 第51-52页 |
| 2.2 双酶切鉴定结果 | 第52页 |
| 2.3 ORF2 基因的鉴定结果 | 第52-53页 |
| 2.4 Cap蛋白诱导表达条件的优化及SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 2.5 表达产物的分析 | 第53-54页 |
| 2.6 Cap蛋白的Western-blot鉴定 | 第54页 |
| 2.7 Cap蛋白的亲和层析纯化 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 4 小结 | 第56-57页 |
| 试验二 PCV2 抗体检测免疫层析试纸的研制及应用 | 第57-74页 |
| 1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 1.1 实验试剂 | 第57页 |
| 1.2 试剂的配制 | 第57页 |
| 1.3 实验仪器 | 第57-58页 |
| 1.4 血清样本 | 第58页 |
| 1.5 胶体金的制备及质量鉴定 | 第58页 |
| 1.6 金标抗原的制备 | 第58-60页 |
| 1.7 金标抗原的点样 | 第60页 |
| 1.8 T线和C线的点样 | 第60-61页 |
| 1.9 样品垫的处理 | 第61页 |
| 1.10 吸水垫的制备 | 第61页 |
| 1.11 试纸的组装 | 第61页 |
| 1.12 试纸条的性能评价 | 第61-63页 |
| 1.13 试纸的临床应用 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 2.1 胶体金的质量鉴定 | 第64页 |
| 2.2 最佳蛋白标记量 | 第64-65页 |
| 2.3 最佳p H标记量 | 第65页 |
| 2.4 试纸的组装 | 第65-66页 |
| 2.5 试纸条的性能评价 | 第66-71页 |
| 2.6 试纸的临床应用 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 3.1 抗体免疫层析试纸的检测原理 | 第72页 |
| 3.2 Cap蛋白的标记 | 第72-73页 |
| 3.3 抗体检测试纸条的推广与应用 | 第73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 硕士期间发表的学术论著 | 第84-86页 |
| 参与课题情况 | 第86页 |
