| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第11-14页 |
| 1.2 甘露聚糖水解与 β-甘露聚糖酶 | 第14-19页 |
| 1.2.1 甘露聚糖降解的相关酶类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 β-甘露聚糖酶的来源和异源表达 | 第15-16页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶的家族 | 第16-17页 |
| 1.2.4 β-甘露聚糖酶催化机制研究 | 第17页 |
| 1.2.5 β-甘露聚糖酶的非催化模块 | 第17页 |
| 1.2.6 β-甘露聚糖酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.3 嗜热微生物及嗜热酶 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 β-甘露聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第21-43页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第21-23页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.4 培养基的配制 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.3.1 β-甘露聚糖酶的标准酶活检测方法 | 第25-26页 |
| 2.3.2 T. aotearoense P8G3 | 第26页 |
| 2.3.3 T. aotearoense P8G3 | 第26-27页 |
| 2.3.4 表达载体pET30a-taman/taman25的构建 | 第27-31页 |
| 2.3.5 pET30a-taman/taman25转化到E. coli DH5? | 第31-32页 |
| 2.3.6 重组质粒pET30a-taman/taman25的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-41页 |
| 2.4.1 T. aotearoense P8G3 | 第34-35页 |
| 2.4.2 taman 基因的克隆 | 第35-38页 |
| 2.4.3 taman25 基因的克隆 | 第38-40页 |
| 2.4.4 β-甘露聚糖酶 Man25 氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第43-58页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-46页 |
| 3.2.1 菌株 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.4 主要试剂溶液的配制 | 第44-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 表达质粒转化到E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosetta(DE3)中 | 第46-47页 |
| 3.3.2 β-甘露聚糖酶的表达 | 第47-49页 |
| 3.3.3 涉及到的检测方法 | 第49-50页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 3.4.1 阳性克隆的筛选 | 第50-51页 |
| 3.4.2 Man25的小量诱导表达及条件优化 | 第51-53页 |
| 3.4.3 Man25的大量表达、亲和层析及脱盐 | 第53-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 β-甘露聚糖酶的酶学性质研究 | 第58-69页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第58页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3.1 最适反应pH和pH稳定性 | 第59页 |
| 4.3.2 最适反应温度和温度稳定性 | 第59页 |
| 4.3.3 底物特异性和动力学参数 | 第59-60页 |
| 4.3.4 金属离子及EDTA对酶活的影响 | 第60页 |
| 4.3.5 依赖钙离子的热稳定性 | 第60页 |
| 4.3.6 透明水解圈实验 | 第60-61页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 4.4.1 最适反应条件与稳定性的研究 | 第61-62页 |
| 4.4.2 底物特异性与动力学参数的测定 | 第62-63页 |
| 4.4.3 金属离子及EDTA对酶活的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.4 依赖钙离子的热稳定性 | 第64-66页 |
| 4.4.5 透明水解圈实验 | 第66-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-71页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附件 | 第81页 |
