| 致谢 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略语表(按首字母顺序) | 第17-24页 |
| 引言 | 第24-32页 |
| 第一章 非病毒基因转染载体的构建、筛选和安全性考察 | 第32-52页 |
| 1.1 实验仪器与材料 | 第32-34页 |
| 1.1.1 仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.2 试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 动物 | 第33-34页 |
| 1.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 1.2.1 BMSC的提取分离与纯化、培养 | 第34页 |
| 1.2.2 报告基因的扩增和抽提 | 第34-35页 |
| 1.2.3 阳离子化普鲁兰多糖衍生物的制备和表征 | 第35页 |
| 1.2.4 载体/pDNA复合物的制备 | 第35-36页 |
| 1.2.5 BMSC的基因转染 | 第36页 |
| 1.2.6 基因转染效率的测定 | 第36页 |
| 1.2.7 细胞毒性的测定 | 第36-37页 |
| 1.2.8 SP/pDNA复合物的粒径与电位测定 | 第37页 |
| 1.2.9 SP/pDNA复合物的胞内分布考察 | 第37页 |
| 1.2.10 SP入胞后在内涵体中的降解 | 第37-38页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 1.3.1 SP聚合物的表征 | 第38-39页 |
| 1.3.2 SP聚合物的合成条件优化 | 第39-40页 |
| 1.3.3 SP/pDNA复合物在不同N/P比下的粒径和电位变化 | 第40-41页 |
| 1.3.4 SP/pDNA复合物在不同N/P比下对BMSC转染效率的影响 | 第41-42页 |
| 1.3.5 不同接枝率对SP转染效率的影响 | 第42-43页 |
| 1.3.6 不同非病毒基因载体在BMSC上的转染效率考察 | 第43-45页 |
| 1.3.7 不同非病毒基因载体的细胞毒性考察 | 第45-46页 |
| 1.3.8 SP/pDNA复合物的细胞内吞过程考察 | 第46-47页 |
| 1.3.9 SP聚合物在BMSC溶酶体中的降解 | 第47-50页 |
| 1.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第二章 静脉注射的BMSC在体内的分布及体内外向肿瘤细胞的趋向性 | 第52-63页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第52-53页 |
| 2.1.1 仪器 | 第53页 |
| 2.1.2 试剂 | 第53页 |
| 2.1.3 细胞 | 第53页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 2.2.1 B16F10胞的培养 | 第53-54页 |
| 2.2.2 体外肿瘤趋向实验 | 第54页 |
| 2.2.3 BMSC的荧光标记 | 第54页 |
| 2.2.4 黑色素瘤肺转移小鼠模型的建立 | 第54页 |
| 2.2.5 荧光标记法观察BMSC在体内的分布 | 第54-55页 |
| 2.2.6 肺部冰冻切片的制备及观察 | 第55页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 2.3.1 BMSC体外向B16F10肿瘤细胞的迁移 | 第55-56页 |
| 2.3.2 黑色素瘤肺转移小鼠模型的考察 | 第56-57页 |
| 2.3.3 BMSC尾静脉注射后在正常小鼠及肿瘤模型小鼠的体内分布 | 第57-59页 |
| 2.3.4 BMSC在正常肺部和荷瘤肺部的分布 | 第59-61页 |
| 2.4 本章小结 | 第61-63页 |
| 第三章 基于BMSC的自杀基因传递系统的抗肿瘤疗效 | 第63-78页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第63-64页 |
| 3.1.1 仪器 | 第63页 |
| 3.1.2 试剂 | 第63-64页 |
| 3.1.3 细胞 | 第64页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第64页 |
| 3.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 3.2.1 重组自杀基因HSV-TK的BMSC | 第64页 |
| 3.2.2 GCV溶液的配制 | 第64-65页 |
| 3.2.3 重组自杀基因的TK-BMSC在体外的自杀作用考察 | 第65页 |
| 3.2.4 MTT法测定细胞死亡率 | 第65页 |
| 3.2.5 体外旁观者效应考察 | 第65页 |
| 3.2.6 表达GFP蛋白的B16F10细胞的诱导和筛选 | 第65-66页 |
| 3.2.7 体外共培养后旁观者效应的动态过程考察 | 第66页 |
| 3.2.8 体外非接触培养后的旁观者效应考察 | 第66页 |
| 3.2.9 重组自杀基因BMSC对小鼠黑色素肺转移模型的疗效考察 | 第66-67页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第67-77页 |
| 3.3.1 BMSC基因重组HSV-TK后的自杀作用考察 | 第67-68页 |
| 3.3.2 不同条件对重组BMSC自杀作用的影响 | 第68-71页 |
| 3.3.3 稳定表达GFP的B16F10细胞株的构建 | 第71-72页 |
| 3.3.4 重组BMSC对肿瘤细胞的体外旁观者效应考察 | 第72-74页 |
| 3.3.5 重组BMSC自杀作用与旁观者效应间的联系 | 第74-75页 |
| 3.3.6 BMSC作为自杀基因的传递载体在体内的抑瘤效果 | 第75-77页 |
| 3.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第四章 基因-药物共靶向传递系统的协同抗肿瘤疗效 | 第78-104页 |
| 4.1 实验仪器与试剂 | 第78-80页 |
| 4.1.1 仪器 | 第78-79页 |
| 4.1.2 试剂 | 第79-80页 |
| 4.1.3 胞 | 第80页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第80页 |
| 4.2 实验方法 | 第80-86页 |
| 4.2.1 包裹GCV的脂质体制备 | 第80-81页 |
| 4.2.2 脂质体的粒径测定及形貌观察 | 第81页 |
| 4.2.3 高效液相色谱-紫外分光光度法(HPLC-UV)测定GCV浓度 | 第81-82页 |
| 4.2.4 脂质体的体外释放考察 | 第82页 |
| 4.2.5 脂质体载体尾静脉注射后的体内分布 | 第82-83页 |
| 4.2.5.1 包裹荧光探针的脂质体制备 | 第82页 |
| 4.2.5.2 包裹荧光探针的脂质体静脉注射后在小鼠体内的分布 | 第82-83页 |
| 4.2.6 肺匀浆的制备及肺部GCV浓度的测定 | 第83页 |
| 4.2.7 脂质体和溶液静脉注射后在肺部的GCV浓度比较 | 第83-84页 |
| 4.2.8 脂质体与BMSC和肿瘤细胞的共定位 | 第84页 |
| 4.2.9 体外三维肿瘤球模型的建立 | 第84页 |
| 4.2.10 TK-BMSC/GCV-lipo对肿瘤球生长抑制评价 | 第84-85页 |
| 4.2.11 TK-BMSC/GCV-lipo共靶向传递系统的体内抑瘤效率评价 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-103页 |
| 4.3.1 HPLC-UV法检测GCV浓度 | 第86-87页 |
| 4.3.2 GCV脂质体的表征 | 第87-89页 |
| 4.3.3 脂质体的体外药物释放过程 | 第89-91页 |
| 4.3.4 脂质体静脉注射后在体内的分布 | 第91-93页 |
| 4.3.5 肺部GCV浓度的测定 | 第93-94页 |
| 4.3.6 脂质体和溶液分别给药后在肺部的GCV浓度比较 | 第94-95页 |
| 4.3.7 脂质体和重组BMSC分别尾静脉注射后在荷瘤肺部的分布 | 第95-97页 |
| 4.3.8 体外三维肿瘤球模型 | 第97-98页 |
| 4.3.9 基于GCV脂质体和重组BMSC的体外肿瘤球生长抑制实验 | 第98-100页 |
| 4.3.10 TK-BMSC协同GCV脂质体共靶向传递后的体内抑瘤效率评价 | 第100-103页 |
| 4.4 本章小结 | 第103-104页 |
| 第五章 BMSC在肿瘤微环境中的分布及对癌巢组织的穿透性 | 第104-124页 |
| 5.1 实验仪器与材料 | 第104-106页 |
| 5.1.1 仪器 | 第104页 |
| 5.1.2 试剂 | 第104-105页 |
| 5.1.3 细胞 | 第105页 |
| 5.1.4 实验动物 | 第105-106页 |
| 5.2 实验方法 | 第106-110页 |
| 5.2.1 肿瘤球穿透实验 | 第106-107页 |
| 5.2.2 稳定表达绿色荧光蛋白的BMSC的培养 | 第107页 |
| 5.2.3 BMSC静脉注射后在肿瘤组织内的分布考察 | 第107页 |
| 5.2.4 乙二胺修饰的普鲁兰多糖的制备和表征 | 第107-108页 |
| 5.2.5 氧化铁纳米粒的制备 | 第108页 |
| 5.2.6 氧化铁纳米粒的粒径、电位及形貌观察 | 第108页 |
| 5.2.7 氧化铁纳米粒的含铁量测定 | 第108-109页 |
| 5.2.8 磁场响应性考察 | 第109页 |
| 5.2.9 氧化铁纳米粒标记BMSC | 第109页 |
| 5.2.10 普鲁士蓝染色和Nuclear fast red染色 | 第109页 |
| 5.2.11 氧化铁纳米粒标记的BMSC在肿瘤局部组织的示踪 | 第109-110页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第110-122页 |
| 5.3.1 BMSC向肿瘤球的穿透 | 第110-113页 |
| 5.3.2 HEK293细胞向肿瘤球的穿透 | 第113页 |
| 5.3.3 双荧光标记法观察BMSC在肿瘤球内的分布 | 第113-115页 |
| 5.3.4 稳定表达绿色荧光蛋白的BMSC的观察 | 第115-116页 |
| 5.3.5 BMSC在肺部肿瘤结节中的分布 | 第116-117页 |
| 5.3.6 乙二胺-普鲁兰多糖修饰的氧化铁纳米粒表征 | 第117-119页 |
| 5.3.7 氧化铁纳米粒的浓度 | 第119-120页 |
| 5.3.8 氧化铁纳米粒标记的BMSC | 第120-121页 |
| 5.3.9 BMSC尾静脉注射后向肿瘤组织的迁移和穿透 | 第121-122页 |
| 5.4 本章小结 | 第122-124页 |
| 第六章 自杀基因重组BMSC作为肿瘤靶向传递载体的初步安全性评价 | 第124-136页 |
| 6.1 实验仪器与材料 | 第124-125页 |
| 6.1.1 仪器 | 第124-125页 |
| 6.1.2 试剂 | 第125页 |
| 6.1.3 试剂 | 第125页 |
| 6.1.4 实验动物 | 第125页 |
| 6.2 实验方法 | 第125-127页 |
| 6.2.1 未重组自杀基因的BMSC对肿瘤生长的影响考察 | 第125-126页 |
| 6.2.2 自杀基因疗法对小鼠的毒副作用考察 | 第126-127页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第127-135页 |
| 6.3.1 BMSC的注射数目对肿瘤发展的影响 | 第127-129页 |
| 6.3.2 自杀基因治疗后的小鼠体重变化 | 第129-131页 |
| 6.3.3 自杀基因疗法对肝脏毒性的考察 | 第131-133页 |
| 6.3.4 自杀基因疗法对肺部急性毒性和长期毒性的考察 | 第133-135页 |
| 6.4 本章小结 | 第135-136页 |
| 全文总结与展望 | 第136-140页 |
| 参考文献 | 第140-150页 |
| 文献综述 | 第150-177页 |
| 参考文献 | 第165-177页 |
| 作者简历 | 第177-179页 |
