| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第13页 |
| ·慢病毒载体及RNA_I | 第13-17页 |
| ·慢病毒及慢病毒载体 | 第13-14页 |
| ·RNA 干扰 | 第14-16页 |
| ·慢病毒载体介导的RNAi | 第16-17页 |
| ·口蹄疫病毒受体研究进展 | 第17-22页 |
| ·整联蛋白受体 | 第17-20页 |
| ·硫酸乙酰肝素受体 | 第20页 |
| ·FMDV 其他受体 | 第20-22页 |
| 第二章 高效干扰牛源整联蛋白ΑV 基因表达效果的SIRNA 片段的筛选 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·生物材料及试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·寡聚核苷酸引物的合成 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·整联蛋白αv 亚基基因siRNA 片段的设计及制备 | 第23页 |
| ·MDBK 细胞系培养及转染 | 第23-24页 |
| ·细胞的收集及总RNA 的提取和纯化 | 第24-25页 |
| ·反转录 | 第25页 |
| ·实时荧光定量PCR 体系的建立 | 第25页 |
| ·实验数据分析 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·siRNA 序列设计及合成 | 第25-26页 |
| ·实时定量PCR 检测结果 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 靶向牛整联蛋白亚基ΑV 的SIRNA 慢病毒载体的构建及病毒滴度的测定 | 第30-39页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·酶及各种试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·pLenti6/BLOCK-iT~(TM)表达质粒DEST-αν483 的构建 | 第33页 |
| ·慢病毒载体在293FT 细胞中的包装 | 第33-34页 |
| ·慢病毒滴度的测定 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-36页 |
| ·进入载体U6-αν483 的构建及测序 | 第35页 |
| ·慢病毒载体plenti6/αv483 的构建及滴度测定 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| 第四章 MDBK 阳性细胞系的建立及鉴定 | 第39-47页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·生物材料及试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·杀稻瘟菌素对MDBK 细胞最小致死浓度的测定 | 第39-40页 |
| ·慢病毒感染MDBK 细胞及抗性筛选阳性细胞系的建立 | 第40页 |
| ·实时荧光定量PCR 法对阳性细胞系的鉴定 | 第40-41页 |
| ·细胞-ELISA 对阳性细胞系的鉴定(间接法) | 第41-42页 |
| ·间接免疫荧光法对阳性细胞系的鉴定 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-45页 |
| ·抗性筛选阳性MDBK 细胞系的建立 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量PCR 法鉴定 | 第43-45页 |
| ·细胞-ELISA 法鉴定 | 第45页 |
| ·间接免疫荧光法鉴定 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 导师简介 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
