| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 国内外m~6A研究现状及发展动态分析 | 第9-15页 |
| 1.1.1 高等生物体内m~6A水平的调控 | 第9-11页 |
| 1.1.2.转录组中检测m~6A的方法 | 第11-13页 |
| 1.1.3 m~6A生理功能的研究 | 第13-15页 |
| 1.1.4 m~6A与人类疾病的关系 | 第15页 |
| 1.2 经典模式动物黑腹果蝇及卵巢发育系统 | 第15-17页 |
| 1.2.1 果蝇的卵巢系统 | 第16-17页 |
| 1.2.2 果蝇中m~6A的相关研究 | 第17页 |
| 1.3 研究问题和意义 | 第17-19页 |
| 第2章 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.1 果蝇卵巢m~6A甲基化修饰的系统分析 | 第19-22页 |
| 2.1.1 主要试剂及配方 | 第19-20页 |
| 2.1.2 用Trizol法提取细胞中的总RNA | 第20页 |
| 2.1.3 从总RNA中提取mRNA | 第20页 |
| 2.1.4 mRNA片段化 | 第20-21页 |
| 2.1.5 IP | 第21-22页 |
| 2.2 运用CRISPR/Cas9技术制造果蝇突变体 | 第22-26页 |
| 2.2.1 gRNA序列的设计和转录模板的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要试剂及配方 | 第24-25页 |
| 2.2.3 gRNA的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 Cas9 mRNA体外转录 | 第25页 |
| 2.2.5 注射果蝇蛋 | 第25-26页 |
| 2.2.6 果蝇突变体的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.7 果蝇突变体后代的鉴定 | 第26页 |
| 2.3 cDNA文库的制备 | 第26-27页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR实验 | 第27-28页 |
| 2.5 免疫荧光 | 第28-30页 |
| 2.5.1 主要试剂配方 | 第28页 |
| 2.5.2 实验步骤 | 第28-30页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第30-35页 |
| 3.1 果蝇卵巢m~6A甲基化修饰的系统分析结果 | 第30-31页 |
| 3.2 早期生殖细胞分化过程中mRNA上的m~6A修饰鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 甲基转移酶突变果蝇早期生殖细胞分化出现异常 | 第32-33页 |
| 3.4 甲基转移酶ime4突变导致早期生殖细胞分化关键基因orb的mRNA表达改变 | 第33-35页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第35-37页 |
| 4.1 讨论 | 第35-36页 |
| 4.1.1 果蝇卵巢m~6A转录组测序提示m~6A可能与早期生殖细胞转录起始有关 | 第35页 |
| 4.1.2 构建甲基转移酶突变体果蝇及表型观察 | 第35-36页 |
| 4.2 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
