| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-27页 |
| 第1章 囊性肾脏疾病与基因条件性敲除的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.1 囊性肾病的分类 | 第15页 |
| 1.2 多囊肾疾病分类 | 第15-16页 |
| 1.3 多囊肾疾病的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.4 Cre/loxP系统 | 第17-19页 |
| 1.4.1 Cre/loxp原理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 Cre-loxp应用 | 第18-19页 |
| 1.5 展望 | 第19-21页 |
| 第2章 AQP2及体细胞核移植转基因猪的研究进展 | 第21-27页 |
| 2.1 肾脏中水通道蛋白以及机体水平衡 | 第21-22页 |
| 2.2 抗利尿激素对肾AQP2的调节 | 第22页 |
| 2.3 AQP2调节机制 | 第22-23页 |
| 2.4 猪体细胞核移植 | 第23-26页 |
| 2.4.1 表观重编程对体细胞核移植的影响 | 第24页 |
| 2.4.2 受体细胞对体细胞核移植的影响 | 第24-25页 |
| 2.4.3 供体细胞对体细胞核移植的影响 | 第25页 |
| 2.4.4 环境因素对体细胞核移植的影响 | 第25页 |
| 2.4.5 体细胞核移植的应用 | 第25-26页 |
| 2.5 展望 | 第26-27页 |
| 第二篇 研究内容 | 第27-79页 |
| 第1章 AQP-Cre表达载体的构建及分析 | 第27-45页 |
| 前言 | 第27-28页 |
| 1.1 材料和方法 | 第28-30页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 1.1.2 相关仪器 | 第28页 |
| 1.1.3 主要溶液及试剂的配制 | 第28-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 1.2.2 总RNA提取 | 第31页 |
| 1.2.3 c DNA合成 | 第31-32页 |
| 1.2.4 RT-PCR | 第32页 |
| 1.2.5 组织蛋白提取 | 第32-33页 |
| 1.2.6 Western Blotting分析 | 第33页 |
| 1.2.7 构建AQP2启动子序列驱动Cre重组酶表达的表达载体 | 第33-36页 |
| 1.2.8 细胞培养及转染 | 第36页 |
| 1.3 结果 | 第36-42页 |
| 1.3.1 分析AQP2在中国小型实验猪组织的表达 | 第36-37页 |
| 1.3.2 肾特异性AQP2-Cre表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 1.3.3 利用LLC-PK1细胞分析AQP2-Cre表达载体瞬时转染后的表达情况 | 第40-42页 |
| 1.4 讨论 | 第42-44页 |
| 1.5 小结 | 第44-45页 |
| 第2章 表达AQP-Cre/loxp的转基因猪的制备 | 第45-63页 |
| 前言 | 第45页 |
| 2.1 材料和方法 | 第45-53页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 2.1.2 相关仪器 | 第46页 |
| 2.1.3 主要溶液及试剂的配制 | 第46-47页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第47-49页 |
| 2.1.5 AQP2-Cre转基因猪各组织中Cre表达模式 | 第49-51页 |
| 2.1.6 组织蛋白提取 | 第51页 |
| 2.1.7 Western Blotting分析 | 第51-52页 |
| 2.1.8 AQP2-Cre转基因猪免疫组织化学分析 | 第52页 |
| 2.1.9 数据统计 | 第52-53页 |
| 2.2 结果 | 第53-60页 |
| 2.2.1 供体细胞的筛选 | 第53-54页 |
| 2.2.2 Cre-AQP2转基因猪的获得 | 第54-56页 |
| 2.2.3 Cre-AQP2转基因猪的鉴定 | 第56-58页 |
| 2.2.4 Western Blotting和免疫组化分析Cre蛋白在转基因猪中的表达位置 | 第58-60页 |
| 2.3 讨论 | 第60-61页 |
| 2.4 小结 | 第61-63页 |
| 第3章 Cre重组酶在转基因猪中的鉴定 | 第63-79页 |
| 前言 | 第63-64页 |
| 3.1 材料和方法 | 第64-71页 |
| 3.1.1 实验动物来源 | 第64页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第64页 |
| 3.1.3 相关仪器 | 第64页 |
| 3.1.4 Cre重组酶功能分析 | 第64-65页 |
| 3.1.5 qPCR分析转基因Cre的拷贝数 | 第65-67页 |
| 3.1.6 hiTAIL-PCR对整合位点的分析 | 第67-71页 |
| 3.1.7 数据分析 | 第71页 |
| 3.2 结果 | 第71-75页 |
| 3.2.1 Cre重组酶重组效率分析 | 第71-72页 |
| 3.2.2 AQP2-Cre基因拷贝数鉴定 | 第72-74页 |
| 3.2.3 AQP2-Cre整合位点分析 | 第74-75页 |
| 3.3 讨论 | 第75-78页 |
| 3.4 小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 导师简介 | 第92-93页 |
| 作者简介及在读期间取得的科研成果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
